概述[1]
比伐盧定(Bivalirudin)屬于直接凝血酶抑制劑(direct thrombin inhibitor，DTI)，由20個(gè)氨基酸殘基組成。比伐盧定為水蛭素衍生物(片段)，人工合成的包含20個(gè)氨基酸殘基的多肽。它主要由兩部分構(gòu)成，一部分是氨基末端(N端)的短肽鏈，含有苯丙氨酸?脯氨酸?精氨酸?脯氨酸序列，能與凝血酶的活性部位發(fā)生特異性結(jié)合，另一部分是含羧基末端(C端)的12肽鏈，兩部分靠四甘氨酸連接，它們與凝血酶的兩個(gè)結(jié)合部位都有很高的親和力。比伐盧定與凝血酶的結(jié)合是可逆的，結(jié)合后很容易在凝血酶的活性部位斷開(kāi)成兩部分并分解出多肽鏈中的脯氨酸?精氨酸序列，使凝血酶的催化活性很快恢復(fù)，所以它的半衰期只有20～25min。
制備方法[2]
1：Fmoc-Pro-Gly-OH的合成
2：Fmoc-Gly-Gly-Gly-OH的合成
3：Fmoc-Pro-Gly-Gly-OH的合成
4：Fmoc-Gly-Gly-Asn(Trt)-OH的合成
5：肽樹(shù)脂1:Leu-WangResin的合成
6：肽樹(shù)脂2:Tyr(tBu)-Leu-WangResin的合成
7-19：肽樹(shù)脂3-肽樹(shù)脂15的合成
21：比伐盧定肽樹(shù)脂的酸解得比伐盧定粗品
20制得的比伐盧定肽樹(shù)脂673.5g，加入酸解試劑（TFA：TIS：EDT：H2O=95：1：2：2）6735ml，攪拌室溫反應(yīng)2小時(shí)，反應(yīng)物用砂芯漏斗過(guò)濾，并用TFA洗滌樹(shù)脂3次（每次600ml），過(guò)濾，合并濾液，濾液減壓濃縮至600-800g，加3L無(wú)水乙醚研磨，析出固體，固體用砂芯漏斗過(guò)濾，并用乙醚洗滌固體3次（每次400ml），過(guò)濾，得白色粉末狀比伐盧定粗品330g。
22：比伐盧定粗品溶液的制備
21制得的還原型比伐盧定粗品330g，加4L水溶解，攪拌下滴加10%碳酸鈉溶液調(diào)PH值4-5，用0.45μm混合濾膜過(guò)濾，得比伐盧定粗品溶液。
23：比伐盧定的制備
高效液相色譜法純化：22制得的比伐盧定粗品溶液，加純水溶液至6400ml得比伐盧定粗品溶液，備用。色譜柱填料為9μm的反相C18，流動(dòng)相A：0.1%TFA-H2O，流動(dòng)相B：0.1%TFA-CH3CN，色譜柱為100mm×270mm，流速為120ml/min，采用梯度洗脫。取比伐盧定粗品溶液，分16次上樣于色譜柱中，每次400ml，啟動(dòng)制備程序進(jìn)行洗脫，收集、合并合格產(chǎn)品溶液，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀、38～40水浴條件下減壓濃縮，蒸去大部分乙腈，用0.45μm濾膜過(guò)濾，得比伐盧定純化濃縮液3500ml，用于制備高效液相色譜進(jìn)行換鹽。
高效液相色譜法換鹽：比伐盧定純化濃縮液3500ml，加純水至4500ml得比伐盧定純化溶液，備用。色譜柱填料為9μm的反相C18，流動(dòng)相A：1%HOAc-H2O，流動(dòng)相B：CH3CN，色譜柱為100mm×270mm，流速為125ml/min，采用梯度洗脫。取比伐盧定純化溶液，分15次上樣于色譜柱中，每次300ml，啟動(dòng)制備程序進(jìn)行洗脫，收集、合并合格產(chǎn)品溶液，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀、38～40水浴條件下減壓濃縮，蒸去大部分乙腈，用0.45μm濾膜過(guò)濾，得比伐盧定三氟醋酸鹽濃縮液2000ml，用于凍干。
取得比伐盧定醋酸鹽濃縮液2000ml，冷凍干燥，得產(chǎn)品192.0g，總收率為55.0%，純度99.85%。
主要參考資料
[1] 孫婧, 田軍, 劉軍翔, 楊國(guó)紅, 李東霞, & 趙季紅, et al. (2014). 國(guó)產(chǎn)比伐盧定用于急性st段抬高型心肌梗死患者急診介入治療術(shù)中的臨床研究. 中國(guó)循環(huán)雜志(7), 497-500.
[2] 比伐盧定多中心臨床研究協(xié)作組, & CooperativeGroupofDomesticBivalirudinMultiCenterClinicalTrial. (2011). 國(guó)產(chǎn)比伐盧定用于冠狀動(dòng)脈介入治療術(shù)中抗凝的療效和安全性評(píng)價(jià). 中國(guó)循環(huán)雜志(5).
[3] 邊素艷, & 蓋魯粵. (2007). 直接凝血酶抑制劑比伐盧定臨床研究進(jìn)展. 中國(guó)介入心臟病學(xué)雜志, 15(3), 178-180.