背景及概述^[1][2]

利那洛肽( linaclotide) 是由美國 Ironwood 公司研發(fā)的一種鳥苷酸環(huán)化酶 C(GC-C) 激動劑，于2012 年 8 月 30 日獲美國 FDA 批準(zhǔn)上市，商品名為 Linzess。該藥為膠囊劑，用于治療便秘腸易激綜合征( IBS-C) 和慢性特發(fā)性便秘(CIC)，它是首個具有此種作用機制的治療便秘的藥物。

利那洛肽是一個 14-氨基酸肽，序列為 L-cysteinyl-L-cysteinyl-L-glutamyl-L-tyrosyl-L-cysteinyl-Lcysteinyl-L-asparaginyl-L-prolyl-L-alanyl-L-cysteinylL-threonyl-L-glycyl-L-cysteinyl-L-tyrosine，cyclic (1-6)，(2- 10)，(5- 13) -tris( disulfide)；為白色至灰白色無定形粉末；微溶于水和氯化鈉水溶液( 0. 9% ) 。利那洛肽口服進入人體后通過與腸道中的鳥苷酸環(huán)化酶 C 型受體(GC-C)結(jié)合，使細胞內(nèi)和細胞外環(huán)鳥苷酸(cGMP)濃度升高，刺激腸液分泌，加快胃腸道移行，從而增加排便頻率，由于其獨一無二的作用機制，很有希望成為一種不但可以治療便秘，還可以治療腹脹、腹痛和其它臨床癥狀的治療藥物.。

規(guī)格^[3]

膠囊：145 μg和290 μg。

用法用量^[3]

1）IBS-C：290 μg口服每天1次；2）CIC：145 μg 口服每天1次；3）空胃服用首次餐至少30分前。

應(yīng)用^[3]

適用于在成年中為治療：1）有便秘腸易激綜合征(IBS-C) ；2）慢性特發(fā)性便秘(CIC)。

臨床研究^[1]

在臨床進行的隨機、雙盲試驗中，將 IBS-C 患者隨機分為治療組(給予利那洛肽 290 μg/d)和安慰劑組，治療至少 12 周，結(jié)果顯示，與安慰劑組相比，利那洛肽在患者腹痛和增加完全自發(fā)排便次數(shù)(CSBMs) 方面更有效。利那洛肽用于慢性特發(fā)性便秘患者的安全性和有效性，在進一步開展的兩項雙盲、多中心臨床試驗中得到了證實，在這兩項研究中，患者被隨機分為安慰劑組、利那洛肽145 μg/d組或利那洛肽 290 μg/d組。

治療 12 周后，劑量為 145 μg/d利那洛肽治療組的患者完全自發(fā)排便次數(shù)明顯高于安慰劑組。而 290 μg/d治療組的臨床效果并沒有太大的提高，故對于慢性特發(fā)性便秘( CIC) 的治療 FDA 只批準(zhǔn)了145 μg/d劑量。該藥的推薦劑量為 290 μg/d (治療 IBS-C) 和 145 μg/d (治療CIC)，于當(dāng)天首餐前至少 30 min 服用。利那洛肽的不良反應(yīng)包括腹瀉、 腹痛和嘔吐。值得注意的是，16 歲及以下的患者。

藥理作用 ^[1]

利那洛肽是一種鳥苷酸環(huán)化酶 C 激動劑，它與腸道 GC-C 結(jié)合后，導(dǎo)致細胞內(nèi)和細胞外環(huán)鳥苷酸( cGMP) 濃度升高。細胞內(nèi) cGMP 升高可以刺激腸液分泌，加快胃腸道移行，從而增加排便頻率；細胞外 cGMP 濃度升高會降低痛覺神經(jīng)的靈敏度、降低腸道疼痛。

藥代動力學(xué)^[3]

吸收：口服給藥后LINZESS吸收少生物利用度低?？诜┝?45 μg或290 μg給藥后利那洛肽及其活性代謝物的濃度血漿中低于定量低限。因此，不能計算標(biāo)準(zhǔn)藥代動力學(xué)參數(shù)例如曲線下面積(AUC)，最高濃度(Cmax)，和半衰期(t½)。

分布：鑒于利那洛肽治療的口服劑量的血藥濃度，是無法衡量的，預(yù)計利那洛肽分布至組織很少。

代謝：利那洛肽在胃腸道內(nèi)通過丟失末端酪氨酸部分被代謝為其主要，活性代謝物。利那洛肽及其代謝物在小腸腔內(nèi)被蛋白解降解為較小肽和天然存在氨基酸。

消除：進食和空腹受試者每天給予290 μg的LINZESS共7天后在糞樣品中回收活性肽平均約5% (空腹)和約3% (進食)和實際上所有為活性代謝物。

不良反應(yīng)^[3]

注意事項^[3]

1. 兒童風(fēng)險在患兒直至6歲LINZESS禁忌。在非臨床研究中，在幼年小鼠中(1至3周齡小鼠；約等于人患兒小于2歲)給予1或2次每天口服劑量利那洛肽后死亡發(fā)生在24小時內(nèi)。在6至17歲患者中避免使用LINZESS.利那洛肽不致死亡在較年長幼小鼠中(約等于人年齡12至17歲)。雖然在較年長幼小鼠中沒有死亡，給予年青幼小鼠死亡和在青少年患者中缺乏臨床安全性和療效數(shù)據(jù)，在6至17歲患者中避免使用LINZESS。

2. 腹瀉：在合并IBS-C和CIC雙盲安慰劑對照試驗中腹瀉是LINZESS-治療患者最常見不良反應(yīng)。LINZESS-治療患者報道的嚴(yán)重腹瀉為2%。I BS-C和CIC人群間腹瀉的發(fā)生率相似。

藥物相互作用^[3]

尚未進行藥物-藥物相互作用研究。給予推薦臨床劑量后血漿中不能檢測到利那洛肽及其活性代謝物；因此，預(yù)計無全身藥物-藥物相互作用或通過血漿蛋白結(jié)合利那洛肽或其代謝物介導(dǎo)的藥物相互作用。根據(jù)體外研究結(jié)果利那洛肽與細胞色素P450酶系統(tǒng)不相互作用。此外，利那洛肽不是外流轉(zhuǎn)運蛋白P糖蛋白(P-gp)的底物也不是其抑制劑。

制備^[4][5][6]

方法1：一種制備利那洛肽的方法，包括以下步驟：

1）Fmoc-Tyr(tBu)-OH與載體樹脂反應(yīng)，得到Fmoc-Tyr(tBu)-樹脂；

2）Fmoc-Tyr(tBu)-樹脂與其他帶有Fmoc保護基團的氨基酸逐一用活化劑偶聯(lián)，得到利那洛肽線性肽樹脂；

3）利那洛肽樹脂經(jīng)脫保護、裂解試劑裂解、得到利那洛肽線性肽；

4）利那洛肽線性肽中的三個二硫鍵經(jīng)氨水/DMSO體系環(huán)化后，得到利那洛肽粗肽；

5）利那洛肽粗肽在堿性緩沖溶液中純化后，凍干即得到利那洛肽純品。

方法2：一種合成利那洛肽的方法，包括以下步驟：

步驟1、合成在SEQ ID NO：1所示氨基酸序列Thr側(cè)鏈上、Cys側(cè)鏈上、Asn側(cè)鏈上、Tyr側(cè)鏈上、Glu側(cè)鏈上偶聯(lián)有保護基以及在C端偶聯(lián)有樹脂載體的利那洛肽樹脂；

步驟2、利那洛肽樹脂酸解脫除所有保護基和樹脂載體得到利那洛肽線性粗肽，然 后采用半胱氨酸鹽酸鹽/DMSO緩沖溶液對利那洛肽線性粗肽進行環(huán)化，按照其N端到C端的 氨基酸順序，形成第1位Cys和第6位Cys的二硫鍵、第2位Cys和第10位Cys的二硫鍵以及第5 位Cys和第13位Cys的二硫鍵得到利那洛肽粗品，粗品純化轉(zhuǎn)醋酸鹽后即得利那洛肽成品。

方法3：一種利那洛肽的固相合成方法，該方法包括如下步驟：

1)利那洛肽樹脂的制備：Fmoc-Tyr(tBu)-OH和載體樹脂反應(yīng)，獲得Fmoc-Tyr(tBu)- 樹脂；以Fmoc-Tyr(tBu)-樹脂為固相載體，采用逐一偶聯(lián)的方式從C端到N端依次偶聯(lián) 13個具有Fmoc保護基團的氨基酸，獲得利那洛肽線性肽樹脂，其中，形成二硫鍵的三 組Cys分別連接Trt、Acm或tBu保護基，同組的Cys連接相同保護基，不同組的Cys 連接不同的保護基；

2)將步驟(1)得到的利那洛肽線性肽樹脂進行切割，脫去除Cys(Acm)和Cys(tBu) 外的所有氨基酸的側(cè)鏈保護基，得到了含有Cys(Acm)和Cys(tBu)的保護基線性肽；

3)氧化步驟(2)得到的線性肽形成對二硫鍵，得到單二硫環(huán)肽；

4)脫除步驟(3)得到的單二硫環(huán)肽中Cys(Acm)中Acm保護基，同時形成第二對二硫鍵，得到雙二硫環(huán)肽；

5)脫除步驟(4)得到的雙二硫環(huán)肽中Cys(tBu)中的tBu保護基，同時形成第三對二硫鍵，得到三二硫環(huán)肽；

6)步驟(5)得到的三二硫環(huán)肽經(jīng)HPLC制備純化，凍干得到利那洛肽。

參考資料

[1] 衛(wèi)高菲. 利那洛肽[J]. 中國藥物化學(xué)雜志, 2013 (1): 78-78.

[2] 葛巍巍, 陳靜, 張也, 等. 半選擇性氧化形成三對二硫鍵合成利那洛肽[J]. 有機化學(xué), 2017, 37(9): 2409-2415.

[3] 利那洛肽說明書

[4] CN201610644791.0 一種制備利那洛肽的方法

[5] CN201510314459.3 一種合成利那洛肽的方法 

[6] CN201510391880.4 一種利那洛肽的固相合成方法