概述及背景

仲丁胺(2一AB)是一種保護(hù)性殺菌劑，對(duì)多種真菌有抗菌活性可用作蒜 薹、青椒、柑橘、葡萄的貯藏期防腐保鮮劑。首先，在歐洲得到廣泛應(yīng)用，我國自1976年開始應(yīng)用。國內(nèi)外尚未見2一AB致癌和誘變作用的報(bào)道，但是，美國已將其對(duì)人體健康的危害等級(jí)定為三級(jí)，并對(duì)其應(yīng)用范圍和允許殘留量作了規(guī)定。已有諸多學(xué)者對(duì)其在果品和蔬菜中殘留量的檢測(cè)技術(shù)進(jìn)行了研究。

仲丁胺的防腐作用[2][3]

仲丁胺是一種具有氨臭味的無色易揮發(fā)液體，能與水和多種有機(jī)溶劑混溶。1964年Eckert等人 用2一AB的磷酸鹽對(duì)31種病原微生物，包括半知菌類、子囊菌和藻狀菌綱的真菌以及細(xì)菌進(jìn)行了抑菌實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)其中7 種病原真菌對(duì)2一AB磷酸鹽敏感，2一AB濃度為50～100 弘g／ml(微克／毫升)時(shí)，即可阻止菌絲生長達(dá)50％；5種真菌比 較敏感，2一AB濃度為250 vg／ml(微克／毫升)時(shí)，可阻止菌絲生長達(dá)50％；細(xì)菌對(duì)2一AB磷酸鹽不敏感。同時(shí)，還發(fā)現(xiàn)2 一AB鹽酸鹽、硫酸鹽、磷酸鹽、醋酸鹽、丙酸鹽和檸檬酸鹽的 效果無明顯差異。

Graham(1970)報(bào)道，用2一AB熏蒸馬鈴薯， 對(duì)Helminthosporium Solani(長蠕孢霉屬真菌)引起的銀粗皮 病也有很好的效果【2J?？梢?，仲丁胺對(duì)多種真菌具有抗菌活 性，可以用來處理果品蔬菜，防止因真菌侵染造成的產(chǎn)品腐爛 變質(zhì)。1975年，聯(lián)合國糧農(nóng)組織(FAo)和世界衛(wèi)生組織 (WHO)推薦將2一AB應(yīng)用于柑橘的采后防腐保鮮，并指出 對(duì)控制蘋果、梨、桃及香蕉的采后病害同樣有效。 2仲丁胺的毒理學(xué)評(píng)價(jià) 1967年，Eli用含有不同劑量2一AB的飼料喂養(yǎng)哺乳期 的奶牛，然后檢測(cè)它們的糞便、血液、牛奶、尿、肝臟、腎臟、脂 肪和肌肉中2一AB殘留量，發(fā)現(xiàn)這些組織中的2一AB含量與 飼料中2一AB的添加量有劑量關(guān)系，2一AB可以被吸收到牛 奶和尿液里，但在牛奶中的殘留量很低。雖然實(shí)驗(yàn)組的瘦肉 中2一AB殘留量并沒有明顯高于對(duì)照組，但是在腎臟和肝臟中有明顯的2一AB殘留。2一AB易于被吸收，并且大部分都 隨尿液排出。

在哺乳期奶牛的投喂實(shí)驗(yàn)中，對(duì)投喂了2一AB的奶牛進(jìn)行體內(nèi)檢測(cè)，結(jié)果表明主要?dú)埩粲谀I臟中，肝臟中也有一定殘留。 在制定ADI之前。美國進(jìn)行了一系列動(dòng)物試驗(yàn)，結(jié)果表明在以下水平內(nèi)不會(huì)發(fā)生毒理學(xué)反應(yīng)：鼠：35 mg／kg(毫克／公 斤)體重(63 mg(毫克)醋酸鹽／kg(公斤)體重)。狗：69 mg／kg (毫克／公斤)體重(125 mg(毫克)醋酸鹽／kg(公斤)體重)。

由于缺乏人體的臨床實(shí)驗(yàn)結(jié)果，在1975年的FAO和 WHO聯(lián)合會(huì)議上，人體ADI值暫時(shí)定為0．2 mg／kg(毫克／公 斤)體重，同時(shí)規(guī)定了在柑橘和柑橘制品中2一AB的殘 留量為：干制柑橘果肉及糖蜜為50 mg／kg(毫克／公斤)，柑橘果實(shí)為30 mg／kg(毫克／公斤)，柑橘果汁為0．5 mg／kg(毫克／ 公斤)。美國將仲丁胺列入農(nóng)藥范疇，規(guī)定其在食品中的殘留 限量為柑橘類果實(shí)(采用過含仲丁胺類保鮮劑)30 mg／kg(毫 克／公斤)、牛腎3 mg／kg(毫克／公斤)、乳和肉及牛副產(chǎn)品(除 牛腎)O．75 mg／kg(毫克／公斤)、柑橘糖漿50 mg／kg(毫克／公 斤)，干制柑橘果肉50 mg／kg(毫克／公斤)。關(guān)于2一AB有無 三致(致癌、致畸、致突變)危險(xiǎn)，還需作進(jìn)一步的代謝實(shí)驗(yàn)。

 我國自1976年河北農(nóng)業(yè)大學(xué)首次合成含2一AB的防腐保鮮劑以來，全國許多單位相繼開展了相關(guān)研究，已經(jīng)證明，2一 AB對(duì)貯藏期間果品蔬菜的防腐保鮮作用。GB2760—1996 (～2002)食品添加劑使用衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定仲丁胺殘留標(biāo)準(zhǔn)為： 柑橘(果肉)0．005 mg／kg，荔枝(果肉)0．009 mg／kg，蘋果(果 肉)0．001 mg／kg，蒜薹和青椒3 mg／kg(毫克／公斤)

仲丁胺殘留量檢測(cè)方法[4]

仲丁胺保鮮劑的應(yīng)用，可以延長果蔬產(chǎn)品的貯藏期。采用適宜的檢測(cè)方法監(jiān)測(cè)果蔬產(chǎn)品中仲丁胺的殘留量，對(duì)保證仲丁胺保鮮劑安全使用十分必要。 目前，2一AB殘留量檢測(cè)方法主要有以下幾種。

1.氣相色譜法(GC)

應(yīng)用氣相色譜法檢測(cè)2一AB殘留量，最早是由McIntire (1953)提出的。之后經(jīng)過Kolbezen(1962)和Day(1966，1968) 的三次改進(jìn)得以完善。這種方法的原理是：利用水蒸汽蒸餾， 將2一AB從樣品中分離出來，用四氯化碳洗滌后以2，4一二 硝基氟苯(2，4一dinitrofluorbenzene，簡稱DNFB)衍生，生成衍 生產(chǎn)物N一仲丁基一2，4一二硝基苯胺(N—butyl一2，4一 dinitroaniline，簡稱BDNA)，經(jīng)薄層分離后，再經(jīng)氣相色譜儀 測(cè)定，根據(jù)保留時(shí)間和峰面積進(jìn)行定性和定量分析。該方法 的回收率為80％～100％，檢測(cè)限為0．1 mg／kg(毫克／公斤)。

Hoshika Y等用該方法分析了包括仲丁胺異構(gòu)體在內(nèi)的13種 低級(jí)脂肪胺，得到很好的分離分析效果。Petro--TurzaM等 用氣相色譜法檢測(cè)了馬鈴薯及其產(chǎn)品中仲丁胺殘留量，均得 到較好的分析效果。 1985年，楊文熙等提出了直接氣相色譜法檢測(cè)低級(jí)脂肪胺。但由于載體對(duì)胺的吸收作用以及胺在柱內(nèi)可能產(chǎn)生的分 解，檢出峰有拖尾現(xiàn)象，準(zhǔn)確度較差，測(cè)定誤差較大，有待改進(jìn)。

2.薄層掃描法(TLS)

1985年，甄增立提出用2，4一二硝基氟苯(2，4一dini． trofluorbnzene，簡稱DNFB)衍生薄層掃描法，檢測(cè)蒜薹中2一 AB殘留量。該方法的樣品前處理、衍生反應(yīng)及薄層分離沿用 了Day等人的方法，但直接采用薄層掃描儀進(jìn)行定量測(cè)定。 崔同應(yīng)用自行合成的對(duì)酞內(nèi)酰胺苯磺酰氯(Phisyl一a)為衍 生劑衍生2一AB，取得了滿意的結(jié)果。該類方法在薄層分離 后直接采用薄層色譜儀進(jìn)行定量測(cè)定，避免了薄層分離后的 解吸處理，簡化了檢測(cè)程序，減少了待測(cè)成分的損失。該法的 回收率一般在90％以上。

3.高效液相色譜法(HPLC)

由于2一AB沒有合適的生色基團(tuán)用于最終檢測(cè)，目前應(yīng)用的高效液相色譜技術(shù)多采用柱前衍生法。所用衍生劑一般具有較強(qiáng)的紫外吸收基團(tuán)或發(fā)射熒光基團(tuán)，可以與2一AB的 一NH2基反應(yīng)生成相應(yīng)的衍生物。用于2一AB檢測(cè)的衍生劑有丹磺酰氯、熒光胺和對(duì)酞內(nèi)酰胺苯磺酰氯【5J。丹磺酰氯 (Dansyl chloride)是5一甲氨基萘一1一磺酰氯的簡稱，是一種 強(qiáng)熒光劑，能專一性地與2一AB的一NH2基反應(yīng)生成丹磺酰 一肽，后者水解生成的丹磺酰一氨基酸可發(fā)射很強(qiáng)的熒光，用 熒光檢測(cè)器檢測(cè)。丹磺酰氯衍生試劑的衍生產(chǎn)物穩(wěn)定，于暗 處4℃保存一個(gè)月?lián)p失率不超過10％，檢測(cè)靈敏度也較高， 最低檢出限可達(dá)O．2 mg／kg(毫克／公斤)。但衍生反應(yīng)所需 時(shí)間較長，一般需要1 h(小時(shí))左右。熒光胺只能與伯胺反 應(yīng)，因此，該衍生試劑比丹磺酰氯更具選擇性，且衍生反應(yīng)迅 速，衍生所需時(shí)間較丹磺酰氯法短，最低檢出限為0．1 mg／kg (毫克／公斤)，平均回收率為99％。崔同等研究了對(duì)酞內(nèi)酰 胺苯磺酰氯(Phisyl—C1)的合成及其性質(zhì)，以及它與胺類化合 物的衍生反應(yīng)【7J。證明該法測(cè)定結(jié)果的線性范圍接近丹磺酰 氯衍生法，而且衍生時(shí)間短，只需普通的紫外檢測(cè)器即可，最 低檢出限為0．17 mg／kg(毫克／公斤)，平均回收率為91．3％。 但該法中的衍生試劑目前尚未形成商品化試劑。與氣相色譜 法相比，該類方法簡化了檢測(cè)程序，且重現(xiàn)性好，缺點(diǎn)是 衍生試劑丹磺酰氯和熒光胺不易獲得，且價(jià)格昂貴。

參考文獻(xiàn)

[1]陳治遠(yuǎn)．仲丁胺系列保鮮劑的研究與應(yīng)用[J]．山西果樹，1995.

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[3] 凌關(guān)庭。唐述潮，陶民強(qiáng)．食品添加劑手冊(cè)[J]．化學(xué)工業(yè)出版社.2003，1127．

[4] 丁雅韻，謝盂峽，鄧志威．丹磺酰氯作為氮基酸柱前衍生試劑衍生條件的研究．北京師范大學(xué)學(xué)報(bào)，2001。37(4)：526．