背景及概述^[1-2]

槲皮素化學名稱為3,3',4',5,7-五羥基黃酮，是植物界分布最廣泛的黃酮類化合物，大約68％的植物中都含有槲皮素，多種食物均含此成分。依據(jù)飲食習慣的不同，人體平均每天攝入10～100mg槲皮素。槲皮素具有廣泛的生物學作用，如抗腫瘤、抗炎、抗氧化、降壓、抗菌、抗病毒、抗過敏、抗血小板聚集和清除自由基等。

槲皮素的生理活性遠高于蘆丁，具有抗氧化、抗病毒，以及增強雌性激素的分泌等性質(zhì)，因此在藥物制劑中，常被用作食品添加劑或輔助藥物給藥。在自然界植物中的分布也很廣泛，但是含量卻很低。槲皮素在植物中的含量也只有千分之幾到萬分之幾，很難提取。

制備^[1-3]

報道一、

a.以黑曲霉菌(Aspergillusniger)在含4％麥芽浸出物和0.5％人參浸出物的培養(yǎng)基中，30℃溫度下通風培養(yǎng)30-40小時，培養(yǎng)后除菌，培養(yǎng)液用80％飽和硫酸銨沉淀酶蛋白，收集沉淀，用pH5.8的0.02M醋酸鈉緩沖液溶解，透析除去硫酸銨，離心除渣，凍干，即得酶。

b.取7克上述酶溶于200毫升pH5.8的0.02M醋酸鈉緩沖液中；取12克市售的商品蘆丁單體與115毫升pH5.8的0.02M醋酸鈉緩沖液和85毫升95％乙醇混合均勻，使反應物蘆丁的濃度為0.01-10％，乙醇濃度為0-35％，在溫度15℃溫度下攪拌反應24小時。

c.溶液中加入36克NaOH，過濾除去蛋白沉淀，濾液中加入400ml2.5NHCl，室溫靜置30分鐘，過濾收集沉淀，沉淀物用蒸餾水充分洗至中性，減壓干燥沉淀，得到6克產(chǎn)物(經(jīng)高效液相色譜法測定槲皮素含量在90％以上)。

上述酶經(jīng)DEAE-Cellulose離子交換樹脂柱方法和BioRed蛋白制備色譜儀(文獻3)分離提純得到兩種甙酶蛋白，用SDS電泳方法測定分子量，其酶蛋白分子量分別為58000和68000。分子量為58000的酶蛋白，水解蘆丁的鼠李糖基，變成異槲皮素；分子量為68000的酶蛋白，水解異槲皮素的葡萄糖基，變成槲皮素。

報道二、

將20L水加熱至沸騰后加入蘆丁100g，并保持攪拌狀態(tài)以溶解蘆丁，待蘆丁溶解完全后，趁熱抽濾，室溫放置過夜析晶，過濾，干燥，得到精制后的蘆丁；將1%體積百分含量的硫酸水溶液加熱至沸騰后加入精制后的蘆丁，精制后的蘆丁與硫酸水溶液的料液比為1kg：25L，水解完全后，過濾，收集濾餅，蒸餾水洗至中性，以pH試紙檢測，達標后將樣品置于烘箱中干燥，得到槲皮素粗品；往槲皮素粗品中按照1kg：15L的液料比加入乙醇，攪拌均勻，靜置，過濾，干燥，得槲皮素成品，槲皮素成品的純度為99.52%，山奈酚的含量為0.20%，異鼠李素的含量為0.13%，其中純度以峰面積歸一法進行計算。

報道三、

1、蘆丁的提取

取200g生藥蘆丁置于容器中，用清水漂洗干凈，撈取上浮的花蕾并棄去下沉的雜質(zhì)，將洗凈的花蕾置于容器中加1000ml蒸餾水加熱，超聲30KHz～50KHz提取45min，不斷補充蒸發(fā)掉的水分，趁熱過濾，收集濾液，濾渣再加400ml蒸餾水用上述同樣的方法提取一次，合并兩次濾液，濃縮至600ml，放置24h后，析出蘆丁，抽濾，沉淀用少量冷水(0～8℃)洗滌三遍，抽干，60℃以下干燥，稱重得粗提蘆丁19.3g，即可計算粗提蘆丁的收率為9.65％。

2、蘆丁精制

將粗制的蘆丁研細，加95％乙醇回流溶解(每2g蘆丁需要添加70毫升乙醇)，趁熱過濾，收取一半的濾液濃縮至原體積的30％～40％(另外一半濾液用于下一步制備槲皮素使用)，放置，析出結(jié)晶，抽濾，干燥，得精制蘆丁，稱重9.16g，即可計算精制蘆丁的收率9.16％。

3、由所得蘆丁制備槲皮素

取上述步驟中保留的一半蘆丁濾液，加入1mol/L的硫酸，水浴回流1～1.5h,待全部水解后，蒸去乙醇，冷卻、析出槲皮素，抽濾。沉淀槲皮素經(jīng)過水洗、抽干后，干燥稱重，得槲皮素6.788g，可計算得率為6.788％，再用乙醇重結(jié)晶，可得黃色針狀結(jié)晶，為槲皮素精品。

參考文獻

[1][中國發(fā)明,中國發(fā)明授權(quán)]CN03133636.1酶法水解蘆丁制備異槲皮素和槲皮素的方法

[2][中國發(fā)明,中國發(fā)明授權(quán)]CN201310608063.0一種高純度槲皮素的制備方法

[3][中國發(fā)明]CN201610130091.X一種從槐花米中提取蘆丁并制備槲皮素的方法