背景及概述^[1][2]

由Pharmacyclics公司和楊森制藥（Jassen）共同研制的依魯替尼（Ibrutinib，商 品名Imbruvica）作為口服的布魯頓酪氨酸激酶（BTK）抑制劑類首創(chuàng)新藥，于2013年2月被 FDA授予突破性治療藥物資格，并分別于2013年11月13日和2014年2月12日批準(zhǔn)為MCL和CLL 的治療藥物。

異構(gòu)體檢測方法^[1]

依魯替尼是單一對(duì)映體，控制其原料藥中的雜質(zhì)含量特別是其對(duì)映異構(gòu)體的含量對(duì)于降低其不良反應(yīng)具有重要的意義。

專利CN 104407067A公開了一種對(duì)依魯替尼及其異構(gòu)體進(jìn)行HPLC檢測的方法，但該方法存在一些弊端，如①運(yùn)行時(shí)間較長，單針運(yùn)行時(shí)間 35min以上；②未列出異構(gòu)體雜質(zhì)的計(jì)算方法，也未進(jìn)行方法學(xué)驗(yàn)證；③未進(jìn)行異構(gòu)體的檢 測限和定量限的確定，異構(gòu)體雜質(zhì)在依魯替尼原料藥中的百分比（即ee值）也未知。由此可見，現(xiàn)有技術(shù)的檢測結(jié)果并不能真實(shí)反應(yīng)藥物中異構(gòu)體雜質(zhì)的含量。基于此，CN201710424005.0提供一種依魯替尼對(duì)映異構(gòu)體檢測方法及其質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。

一種依魯替尼對(duì)映異構(gòu)體的檢測方法，其包括如下步驟：

1）系統(tǒng)適用性試驗(yàn)溶液的制備：以甲醇為溶劑，將依魯替尼對(duì)映異構(gòu)體對(duì)照品配 制成濃度為0.5mg/mL的異構(gòu)體儲(chǔ)備溶液；另取依魯替尼對(duì)照品，按照質(zhì)量體積比5:1（W/V） 加入所配制的異構(gòu)體儲(chǔ)備溶液，再加甲醇溶解至溶液中依魯替尼的濃度為0.5mg/mL，作為 系統(tǒng)適用性試驗(yàn)溶液；

2）對(duì)映異構(gòu)體對(duì)照品溶液的制備：以甲醇為溶劑，將依魯替尼對(duì)映異構(gòu)體對(duì)照品 配制成濃度為0.25mg/mL的異構(gòu)體母液；然后精密量取該異構(gòu)體母液，以甲醇為溶劑，按體 積比1:100進(jìn)行稀釋，將稀釋后的溶液作為對(duì)映異構(gòu)體對(duì)照品溶液；

3）供試品溶液的制備：精密稱取依魯替尼待測樣品，以甲醇為溶劑配制成濃度為 0.5mg/mL的溶液，作為供試品溶液；

4）色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：采用菲羅門手性柱（LUX Cellulose-4，規(guī)格250×4.6mm）；以正己烷-丙二醇-二乙胺（90:10:0.1，V/V/V）為流動(dòng)相，流量1.2ml/min；檢測波長 為260nm；取步驟1）制備的系統(tǒng)適用性試驗(yàn)溶液進(jìn)行系統(tǒng)適用性試驗(yàn)，依魯替尼與依魯替尼 對(duì)映異構(gòu)體的分離度應(yīng)>5.0，理論塔板數(shù)按依魯替尼峰計(jì)應(yīng)不低于5000；

5）依魯替尼對(duì)映異構(gòu)體測定：取步驟2）所制備的對(duì)映異構(gòu)體對(duì)照品溶液及步驟3）所制備的供試品溶液各10μL，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算對(duì) 映異構(gòu)體的含量。

本發(fā)明還提供了一種依魯替尼對(duì)映異構(gòu)體的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)，其中依魯替尼對(duì)映異構(gòu)體的含量測定按上述檢測方法進(jìn)行，所測得依魯替尼對(duì)映異構(gòu)體的含量不得超過0.5％。 若為更加嚴(yán)格的控制產(chǎn)品質(zhì)量，保證用藥安全性，該對(duì)映異構(gòu)體檢查的標(biāo)準(zhǔn)可提高為不得過0.1％。

本發(fā)明檢測方法具有較高的準(zhǔn)確度、精密度，耐用性強(qiáng)，可以準(zhǔn)確反映依魯替尼原料藥中對(duì)映異構(gòu)體的含量，適合工業(yè)上用于依魯替尼對(duì)映異構(gòu)體的檢查及質(zhì)量控制，可以為質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的制定提供合理的依據(jù)，以便能夠更好的控制和掌握產(chǎn)品質(zhì)量，并有利于提高臨床用藥的安全性。

無定型制備^[2]

以乙二醇單甲基醚做良性溶劑制備無定型依魯替尼

準(zhǔn)確稱取依魯替尼3.0g，置于30mL容積的單口圓底燒瓶中，然后向其中加入6mL乙二醇 單甲醚，在45℃下攪拌至溶液澄清。然后另取200mL容積的單口圓底燒瓶，并加入18mL去離 子水和攪拌磁子，維持體系處于45℃，并在攪拌過程中將制備的依魯替尼乙二醇單甲醚溶 液逐滴滴入攪拌的水中，滴加完畢后繼續(xù)在45℃下攪拌2h，然后過濾出固體，將濾出的固體加入100mL去離子水中打漿1h，過濾出打漿的固體，并采用去離子水洗滌后，真空干燥固體 至恒重，得到固體依魯替尼2.55g，收率為85%。PXRD測試圖如附圖1所示，可見所制備的依魯替尼為無定型產(chǎn)品。

制劑^[3]

含有依魯替尼和人血清白蛋白(HSA)的組合物，制備的依魯替尼和HSA的重量比為約1:200。

在小瓶中，將依魯替尼(2mg)溶解于甲醇(3.5ml)中，得到澄明的溶液。在圓底燒瓶中，將HSA粉末(400mg)(購買自SeraCare Life Sciences的不含天然脂肪酸的人血清白蛋白，產(chǎn)品代碼：HS-455-80，其含有脂肪酸<0.2mg/gm)溶解于8ml水中。在0℃下，在快速攪拌下，將依魯替尼甲醇溶液緩慢滴加到裝有HSA溶液的燒瓶中。添加完成后，得到澄明的溶液。然后，在真空下除去溶液中的甲醇，得到澄明的溶液。用0.22微米水相過濾器過濾澄明的水溶液。將得到的澄明的水溶液凍干過夜，得到白色固體。

主要參考資料

[1] CN201710424005.0 一種依魯替尼對(duì)映異構(gòu)體的檢測方法

[2] CN201710985299.4 一種無定型依魯替尼的制備方法

[3] CN201780050924.4 依魯替尼制劑