背景^[1-3]

酯化梭狀芽孢桿菌PCR試劑盒是一種用于檢測酯化梭狀芽孢桿菌的試劑盒，采用PCR技術(shù)進行檢測。該試劑盒具有以下特點：

即開即用：用戶只需要提供DNA模板，無需進行額外處理。

高特異性：引物經(jīng)過精心優(yōu)化，專一性強，只擴增酯化梭狀芽孢桿菌，與其他微生物沒有交叉反應(yīng)。

陽性對照：提供陽性對照，便于區(qū)分假陰性樣品。

上樣方便：PCR mix中含上樣染料，PCR后可以直接上樣電泳。

酯化梭狀芽孢桿菌PCR試劑盒適合科研使用：本試劑盒足夠做40μL體系的PCR 50次，但只能用于科研。

需要注意的是，使用酯化梭狀芽孢桿菌PCR試劑盒PCR反應(yīng)液時需在冰中配置，以保持其穩(wěn)定性。同時，為了確保檢測結(jié)果的準確性，建議在多次重復實驗后取平均值作為最終結(jié)果。

酯化梭狀芽孢桿菌PCR試劑盒

酯化梭狀芽孢桿菌PCR試劑盒的操作步驟如下：

1.樣本采集：從患者體內(nèi)采集血液、糞便、組織等樣本，并將其保存在無菌容器中。

2.DNA提取：將采集到的樣本進行DNA提取，通常采用柱式或磁珠式DNA提取試劑盒。提取后的DNA應(yīng)保存在-20°C或更低的溫度下。

3.PCR反應(yīng)體系準備：根據(jù)酯化梭狀芽孢桿菌PCR試劑盒說明書的要求，配制PCR反應(yīng)體系，包括引物、熒光探針、dNTPs、DNA聚合酶等。

4.PCR反應(yīng)：將提取的DNA加入到PCR反應(yīng)體系中，進行PCR反應(yīng)。反應(yīng)條件和時間根據(jù)試劑盒說明書的要求進行設(shè)置。

5.結(jié)果分析：將PCR反應(yīng)后的產(chǎn)物進行熒光信號檢測，根據(jù)熒光信號的出現(xiàn)情況判斷是否存在酯化梭狀芽孢桿菌的感染。

應(yīng)用^[4][5]

酯化梭狀芽孢桿菌PCR試劑盒可以用于艱難梭狀芽孢桿菌在喘息兒童糞便中的變化及免疫相關(guān)性的探討

通過酯化梭狀芽孢桿菌PCR試劑盒優(yōu)化的實時熒光定量PCR技術(shù)，檢測喘息兒童腸道糞便中艱難梭狀芽胞桿菌的含量，同時采用ELISA方法，檢測喘息兒童血清中IL-2及IL-4濃度，以探討毛細支氣管炎（簡稱毛支）與支氣管哮喘發(fā)作期（簡稱哮喘發(fā)作）兩種疾病與艱難梭狀芽孢桿菌的相關(guān)性，并試圖闡釋毛支與哮喘發(fā)作患兒免疫機制的改變。

方法：實驗組：所需糞便及血液樣本來源于2013年10月-2014年10月，吉林大學白求恩第一醫(yī)院小兒呼吸一科，住院毛支患兒及哮喘發(fā)作患兒。對照組：糞便樣本及血液來源于相同時間，吉林大學白求恩第一醫(yī)院兒外科無感染先天性畸形，如疝氣、鞘膜積液等疾病患兒。實驗組中毛支患兒66例，哮喘發(fā)作患兒20例；對照組患兒68例。應(yīng)用試劑盒提取糞便樣本中總DNA，選擇艱難梭狀芽胞桿菌特異性基因16S rRNA作為擴展區(qū)，設(shè)計該菌的特異性引物。在酯化梭狀芽孢桿菌PCR試劑盒PCR擴增出目的片段的基礎(chǔ)上，進行回收純化，提高DNA回收量，測定模板濃度，用作標準品。應(yīng)用SYBR GreenⅠ染料法，對待測樣品中艱難梭狀芽胞桿菌含量進行定量分析。使用GraphPad Prism5軟件進行統(tǒng)計學分析。使用ELISA試劑盒，按照說明書的具體步驟對留取的實驗組及對照組全部血清進行IL-2及IL-4檢測，并使用curve expert1.4統(tǒng)計學分析，探討艱難梭狀芽孢桿菌在喘息兒童糞便中的變化及兒童毛支與哮喘發(fā)作期免疫機制的改變。

結(jié)果：1.酯化梭狀芽孢桿菌PCR試劑盒實時熒光定量PCR技術(shù)可檢測出人體腸道糞便中艱難梭狀芽孢桿菌的含量，并且特異性強、重復性好、靈敏度高。2.毛細支氣管炎患兒糞便中艱難梭狀芽胞桿菌含量與對照組相比升高p＝0.0349，有統(tǒng)計學意義。3.支氣管哮喘發(fā)作期患兒糞便中艱難梭狀芽胞桿菌含量與正常對照組相比升高p＝0.044，有統(tǒng)計學意義。

參考文獻

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