概述^[1]

醋酸阿托西班注射液是由FerringGmbH研制的一種新的抗早產(chǎn)藥，為歐洲醫(yī)學(xué)會(huì)推薦的一線用藥，是一種催產(chǎn)素類似物，是子宮內(nèi)及脫膜、胎膜上催產(chǎn)素受體的競爭性拮抗劑，可劑直接與催產(chǎn)素競爭催產(chǎn)素受體，抑制催產(chǎn)素和催產(chǎn)素受體結(jié)合，從而直接抑制催產(chǎn)素作用于子宮，抑制子宮收縮，也可以抑制磷脂酰肌醇的水解作用，阻斷第二信使的生成以及Ca2+的活動(dòng)，從而間接抑制子宮對(duì)催產(chǎn)素的反應(yīng)，使子宮收縮得到抑制，推遲不足月分娩，達(dá)到保胎的目的，在臨床上用于治療早產(chǎn)。

醋酸阿托西班是由9個(gè)氨基酸組成的二硫鍵型的環(huán)狀多肽，是1，2，4和8位修飾的縮宮素分子，肽的N端為3-巰基丙酸(巰基與[Cys]6的巰基形成二硫鍵)，C端為酰胺的形式，N端第二氨基酸是乙基化修飾的[D-Tyr(Et)]2，醋酸阿托西班在藥品中以醋酸鹽的形式存在，通用名為醋酸阿托西班，肽序如下：

Mpa-D-Tyr(Et)-IIe-Thr-Asn-Cys-Pro-Orn-Gly-NH2XCH3COOH。

應(yīng)用^[3]

醋酸阿托西班為環(huán)九肽，是一種催產(chǎn)素類似物，是子宮內(nèi)及蛻膜、胎膜上催產(chǎn)素受體的競爭性拮抗劑，可劑量依賴的抑制宮縮，推遲不足月分娩，達(dá)到保胎的目的，在臨床上用于治療早產(chǎn)。

制備^[2]

1.樹脂制備

制備Fmoc-Orn(Boc)-2-氯-三苯甲基樹脂：將2-氯-三苯甲基氯樹脂(5g，取代值0.84mmol/g樹脂，1eq)加入多肽合成器，用60mL DCM洗滌樹脂。抽干溶劑，加入Fmoc-Orn(Boc)-OH(1.3eq)和DIEA(2.5eq)的30mL DCM溶液。氬氣保護(hù)機(jī)械攪拌該混合物1小時(shí)。加入色譜甲醇10mL(2ml/g樹脂)對(duì)樹脂上的活性部分進(jìn)行30分鐘封閉。抽干溶劑，用3×50mL DMF、3×50mL DCM、3×50mL MeOH洗滌，真空干燥至恒重，獲得6.29g Fmoc-Orn(Boc)-2-氯-三苯甲基樹脂。利用紫外分光光度法測量哌啶脫保護(hù)液中Fmoc量，樹脂的荷載量為0.62mmol/g。

2.片段制備

肽片段AA(1-8)-OH(已環(huán)化)的制備：

向肽反應(yīng)室中加入5g Fmoc-Orn(Boc)-2-氯-三苯甲基樹脂。加入60mL DCM攪拌溶脹樹脂，抽干。用2×50mL 20％哌啶/DMF溶液分別5，15分鐘處理樹脂，去除Fmoc。用50mL DMF冼滌所述樹脂4次，去除Fmoc副產(chǎn)物(二苯并富烯和其哌啶加合物)和殘余哌啶，茚三酮試驗(yàn)測定。

同時(shí)活化序列中的后續(xù)氨基酸Fmoc-Pro-OH，以在其羧基末端反應(yīng)。將Fmoc-保護(hù)的氨基酸(2eq)、HOBt(2eq)和DIEA(4eq)在室溫下溶解于25mL DMF中。氬氣保護(hù)下把該溶液冰浴冷卻至0℃，然后加入HBTU(2eq)，攪拌5分鐘溶解。將活化的氨基酸溶液加入到抽干的樹脂中，用5mL DCM洗滌。機(jī)械攪拌所述反應(yīng)物1小時(shí)。用定性茚三酮試驗(yàn)監(jiān)測縮合完成情況。在判定所述縮合反應(yīng)完成后，則抽干樹脂，用3×50mL DMF洗滌樹脂。

依次用Fmoc-保護(hù)的氨基酸Cys(Trt)、Asn(Trt)、Thr(tBu)、Ile、D-Tyr(Et)、Mpa(Trt)各2eq，對(duì)所述肽片段后續(xù)單體重復(fù)該操作過程。在最后一個(gè)偶合反應(yīng)后，加入6當(dāng)量的I2/DMF，反應(yīng)2小時(shí)，抽干，反復(fù)使用DMF洗滌，抽干樹脂床，用3×50mL DMF、3×50mL DCM、3×50mL MeOH洗滌，真空干燥至恒重，獲得8.67g樹脂結(jié)合肽。

用100mL l％TFA/DCM處理約1小時(shí)，然后用2×50mL 0.5％TFA/DCM各洗滌5分鐘，從樹脂裂解所述肽。將裂解部分收集到吡啶(與TFA體積比1:1)上。合并裂解洗滌液，真空下濃縮至約10mL體積，然后用10mL DMF重構(gòu)，同時(shí)繼續(xù)濃縮以去除殘余DCM至終體積約10mL。加入100mL水沉淀產(chǎn)物。室溫下攪拌該淤漿30分鐘。真空過濾收集所述固體，用約100mL水洗滌。再加入20mM維生素C水溶液去除未反應(yīng)I2。真空干燥所述產(chǎn)物，獲得3.76g純度97％AA(1-8)-OH(已環(huán)化)，產(chǎn)率94％。

分子式：C65H97N9O14S2，分子量：1291.67

3.片段縮合過程

通過液相縮合片段制備AA(1-9)-NH2(已環(huán)化)

圓底燒瓶中加入775mg AA(1-8)-OH(已環(huán)化)(0.6mmol)、330mgH-Gly-NH2·HCl(3mmol)和81mg HOBt(0.6mmol)。將所述固體溶解于20mL DMF，加入695μL DIEA(4.2mmol)，然后在氬氣保護(hù)下冷卻至0℃。向冷卻的溶液中加入227mgHBTU(0.6mmol)。在0℃攪拌反應(yīng)混合物1小時(shí)，然后升至室溫，再攪拌1小時(shí)。加入60mL水從所述溶液中沉淀肽。真空過濾收集固體，用2×50mL水洗滌，干燥獲得761mg粗品AA(1-9)-NH2(已環(huán)化)。在室溫下用100mL MTBE研磨所述固體3小時(shí)，真空過濾收集，干燥獲得801mg AA(1-9)-NH2(已環(huán)化)，收率99％。

反應(yīng)過程TLC控制，TLC條件：氯仿/甲醇/TFE＝80:6:6；UV，碘檢測；

AA(1-8)-OH(已環(huán)化)，Rf：0.41；

AA(1-9)-NH2(已環(huán)化)，Rf：0.30。

分子式：C67H101N11O14S2，分子量：1347.70。

4.醋酸阿托西班的裂解及純化

4.1通過去除側(cè)鏈保護(hù)AA(1-9)-NH2(已環(huán)化)制備醋酸阿托西班粗肽

圓底燒瓶中加入三氟乙酸/水/三異丙基硅烷/1,2-乙二硫醇(92.5:2.5:2.5:2.5)溶液50mL，并冷卻至0℃。向該冷卻溶液中加入800mg AA(1-9)-NH2(已環(huán)化)。在0℃攪拌所述淤漿直到所述固體溶解(約5分鐘)，然后升至室溫，攪拌3小時(shí)。將該溶液加入0℃乙醚70mL沉淀所述肽。以3000rpm離心旋轉(zhuǎn)淤漿5分鐘，從所述固體傾析乙醚。將所述固體再懸浮于50mL乙醚中，以3000rpm離心旋轉(zhuǎn)5分鐘，傾析乙醚。重復(fù)該過程一次，然后將固體溶解于含有1％乙酸的1:1水/乙腈30mL中，在室溫下保存24小時(shí)。將該溶液冷凍，然后冷凍干燥獲得578mg醋酸阿托西班粗肽，產(chǎn)率98％。

4.2HPLC純化醋酸阿托西班粗肽

45mg醋酸阿托西班粗肽經(jīng)制備型HPLC純化產(chǎn)生全長醋酸阿托西班純品20.3mg，產(chǎn)率45％。

HPLC純化條件：色譜柱：Waters C18250×19,5u,130A；流速：8mL/min；檢測：UV，220nm；流動(dòng)相：A.80％乙腈/水；B.0.25％醋酸/水；方法：20％-45％A，10min；45-55％A，30min。

主要參考資料

[1] 王丹. . 醋酸阿托西班治療先兆早產(chǎn)臨床療效分析. 中國婦幼保健, v.33(18), 4104-4108.

[2] 陳靜儀, 張秀群, & 鐘美雄. . 醋酸阿托西班治療先兆早產(chǎn)的臨床療效分析. 中國現(xiàn)代藥物應(yīng)用(17).

[3] 王亞凡, 劉曉旭, 梁建梅, 董欣, 杜娟, & 秦麗欣, et al. . 醋酸阿托西班治療晚期流產(chǎn)及早產(chǎn)的療效觀察. 國際婦產(chǎn)科學(xué)雜志(1), 49-50,共2頁.