gRNA文庫(kù)構(gòu)建基本原理是通過(guò)一段與靶標(biāo)DNA相同的gRNA指導(dǎo)Cas9核酸酶對(duì)靶向基因進(jìn)行DNA修飾，以此造成基因的功能突變或缺失。在此基礎(chǔ)上，利用CRISPR/Cas9技術(shù)建立哺乳動(dòng)物全基因組突變庫(kù)或者與某類功能相關(guān)的基因突變體庫(kù)，通過(guò)功能性篩選和富集以及隨后的PCR擴(kuò)增和深度測(cè)序分析，發(fā)掘與篩選表型相關(guān)的基因，稱為CRISPR/Cas9 gRNA文庫(kù)篩選。

CRISPR-Cas9系統(tǒng)是一種強(qiáng)大的基因組編輯工具，如風(fēng)暴一般席卷了整個(gè)基因組工程領(lǐng)域。最近Andrea Ventura等人報(bào)道了這一系統(tǒng)在gRNA 文庫(kù)構(gòu)建方面的應(yīng)用，而這樣的應(yīng)用往往需要同時(shí)表達(dá)一對(duì)gRNA，比如用Cas9切口酶進(jìn)行大片段刪除。CRISPR-Cas9是細(xì)菌在漫長(zhǎng)的進(jìn)化過(guò)程中演化出的重要防御機(jī)制。這個(gè)監(jiān)控體系能夠根據(jù)引導(dǎo)RNA（gRNA）的指示，靶標(biāo)并降解入侵者的遺傳物質(zhì)。