背景^[1-3]

結(jié)晶紫中性紅膽鹽瓊脂(VRBA)是一種固體鑒別培養(yǎng)基，主要用于大腸菌群的固體平板檢測。

成分(g/L)：蛋白胨7.0，酵母浸粉3.0，氯化鈉5.0，乳糖10.0，膽鹽1.5，結(jié)晶紫0.002，中性紅0.03，瓊脂15.0，pH值7.4±0.1。

結(jié)晶紫中性紅膽鹽瓊脂(VRBA)

結(jié)晶紫中性紅膽鹽瓊脂(VRBA)用法：

稱取結(jié)晶紫中性紅膽鹽瓊脂(VRBA)干粉41.5g，加熱溶解于1000ml蒸餾水中，煮沸不要超過2分鐘。取適宜稀釋度樣品液1ml，加入到無菌平皿中心，將冷至45-50℃的VRBA 10-15ml傾注于平皿中。小心旋轉(zhuǎn)平皿將培養(yǎng)基與樣液充分混勻。凝固后，再加3-4ml VRBA覆蓋平板表層，翻轉(zhuǎn)平板，置于36±1℃培養(yǎng)18-24小時。無需高壓滅菌。臨用時制備，不得超過3小時。

結(jié)晶紫中性紅膽鹽瓊脂(VRBA)檢驗原理：

蛋白胨和酵母浸粉提供碳氮源、維生素、生長因子和輔酶等其他營養(yǎng)物質(zhì)；氯化鈉維持均衡的滲透；乳糖為可發(fā)酵碳水化合物，可作為一種能量來源；結(jié)晶紫對革蘭氏陽性菌如葡萄球菌、白喉桿菌，以及綠膿桿菌、白念珠菌、表皮癬菌有殺滅作用，對其他革蘭氏陰性菌和抗酸菌幾乎無作用；中性紅為指示劑；瓊脂是培養(yǎng)基的凝固劑。

結(jié)晶紫中性紅膽鹽瓊脂(VRBA)外觀：

干粉培養(yǎng)基為淡紅色粉末。

制備好的培養(yǎng)基為紫紅色透明固態(tài)。

使用結(jié)晶紫中性紅膽鹽瓊脂(VRBA)的注意事項：

本品僅限于實驗室使用。

干粉培養(yǎng)基出現(xiàn)過期、結(jié)塊或變色，請勿使用。

結(jié)晶紫中性紅膽鹽瓊脂(VRBA)保存條件和保質(zhì)期：

干粉培養(yǎng)基在5-30°C下干燥避光保存，其保質(zhì)期為三年。

制備好的培養(yǎng)基須在2-8°C干燥避光保存。

應(yīng)用^[4][5]

結(jié)晶紫中性紅膽鹽瓊脂(VRBA)可以用于食品中大腸菌群檢測方法與指標(biāo)值對應(yīng)關(guān)系的研究

國家標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定食品中大腸菌群檢測方法為：GB/T 4789.3-2003(一種方法,簡稱2003版方法,單位:MPN/100g(mL))與GB 4789.3-2010(第一法：大腸菌群MPN計數(shù)法,簡稱2010版MPN計數(shù)法,單位:MPN/g(mL);第二法：使用結(jié)晶紫中性紅膽鹽瓊脂(VRBA)的大腸菌群平板計數(shù)法,簡稱VRBA法,單位：CFU/g(mL))。目前,產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)中大腸菌群指標(biāo)值大多數(shù)是根據(jù)2003版方法制定,因缺乏與2010版相對應(yīng)的指標(biāo)值,許多企業(yè)及檢驗機構(gòu)在檢測時對方法選取及指標(biāo)值判斷易產(chǎn)生混亂造成漏檢。因此,本論文對2010版大腸菌群檢測方法與產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)中大腸菌群指標(biāo)值的對應(yīng)關(guān)系進行了研究。

本研究首先通過標(biāo)準(zhǔn)菌株試驗及樣品驗證對比,分析了2003版方法與2010版MPN計數(shù)法的靈敏度及區(qū)別,并對其差異原因進行分析；其次對2010版兩種檢測方法的靈敏度、適用性進行分析,最后對醬腌菜、冰淇淋、糕點、肉制品中大腸菌群檢測方法與產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)指標(biāo)值的對應(yīng)關(guān)系進行了研究,建立了與2010版MPN計數(shù)法相對應(yīng)的4大類食品中大腸菌群指標(biāo)值。同時,對4大類食品設(shè)置指標(biāo)值的大小及適用不同檢測方法的原因進行了探討。

主要研究內(nèi)容和結(jié)論如下：(1)通過標(biāo)準(zhǔn)菌株及50份樣品驗證,對2003版方法與2010版MPN計數(shù)法進行對比研究,結(jié)果表明2003版方法靈敏度較低,原因在于2010版初發(fā)酵培養(yǎng)基中月桂基硫酸鈉代替了2003版初發(fā)酵培養(yǎng)基中的膽鹽,且月桂基硫酸鈉對大腸菌群有修復(fù)作用。(2)通過標(biāo)準(zhǔn)菌株對結(jié)晶紫中性紅膽鹽瓊脂(VRBA)VRBA法與平板計數(shù)法進行對比研究,檢測結(jié)果分別為：3.9×106MPN/g(mL)、4.7×106MPN/g(mL),證實結(jié)晶紫中性紅膽鹽瓊脂(VRBA)VRBA法在大腸桿菌檢測中有較好靈敏度。用2010版MPN計數(shù)法與VRBA法對120份樣品進行檢測,不合格率分別為：10.8%、12.5%,差異較小,且VRBA法有較好靈敏度。但MPN計數(shù)法為最大概率值,結(jié)晶紫中性紅膽鹽瓊脂(VRBA)VRBA法為準(zhǔn)確定量值,建議國家在要求比較嚴(yán)格的食品種類,例如嬰幼兒及老年食品中采取VRBA法檢測,且對相應(yīng)指標(biāo)值進行修改。

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