背景[1-5]
circRNA FISH試劑盒是以熒光標(biāo)記取代同位素標(biāo)記而形成的一種新的原位雜交方法，具有安全、快速、靈敏度高、探針保存時(shí)間長、能同時(shí)顯示多種顏色等優(yōu)點(diǎn)。circRNA的亞細(xì)胞位置上也呈多樣化，在細(xì)胞核、細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞器均有分布，甚至某些circRNA具有獨(dú)特的亞細(xì)胞位置，有可能是全新的亞細(xì)胞構(gòu)成。
環(huán)狀RNA（circular RNA）是一類存在于真核生物細(xì)胞質(zhì)內(nèi)的特殊的非編碼RNA，具有閉合環(huán)狀結(jié)構(gòu)。在生物體內(nèi)參與了調(diào)控miRNA及其他類型RNA、蛋白質(zhì)活性及功能等。組織特異性：不同組織之間的circRNA表達(dá)量不同。時(shí)空特異性同一組織或器官的不同生長階段，其中的circRNA表達(dá)量也會變化。circRNA的亞細(xì)胞位置上也呈多樣化，在細(xì)胞核、細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞器均有分布，甚至某些circRNA具有獨(dú)特的亞細(xì)胞位置，有可能是全新的亞細(xì)胞構(gòu)成。
circRNA實(shí)時(shí)定量PCR檢測時(shí)高通量篩選后驗(yàn)證的必選實(shí)驗(yàn)，基于qPCR檢測技術(shù)的circRNA表達(dá)與差異分析是對測序、芯片結(jié)果的有效補(bǔ)充和驗(yàn)證，是確定研究對象并進(jìn)行后續(xù)功能研究或分子標(biāo)志物篩選的基礎(chǔ)。根據(jù)circRNA的閉合環(huán)形結(jié)構(gòu)，針對其接頭序列設(shè)計(jì)Divergent primers，能有效與線性RNA區(qū)分開來，排除線性RNA干擾。我們專業(yè)的引物設(shè)計(jì)和PCR反應(yīng)體系優(yōu)化，可有效保障檢測數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性和可靠性，可檢測包括細(xì)胞、組織、血液和外泌體等多種樣本中circRNA差異表達(dá)情況。
circRNA FISH試劑盒特點(diǎn)：
1、安全、快速、重復(fù)性好；
2、特異性100%，靈敏度超過90%；
3、探針性能穩(wěn)定，低溫保存一年以上；
4、熒光信號強(qiáng)，結(jié)果判定直觀可靠；
5、操作簡單，定位精準(zhǔn)，無實(shí)驗(yàn)污染。
優(yōu)點(diǎn)：
1.準(zhǔn)確性：針對circRNA拼接位點(diǎn)，設(shè)計(jì)跨接頭引物，即便在相應(yīng)線性RNA存在的情況下也能特異性檢測circRNA，使circRNA的檢測準(zhǔn)確可靠；
2.特異性：每一對特異引物都經(jīng)過實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，熔解曲線都呈單峰，電泳條帶均呈單一條帶，擴(kuò)增產(chǎn)物大小與目的基因相符；
3.專業(yè)性：每對circRNA引物均由有著多年circRNA研究經(jīng)驗(yàn)的專業(yè)人員進(jìn)行設(shè)計(jì)，并通過實(shí)驗(yàn)嚴(yán)格驗(yàn)證引物的特異性，保證研究結(jié)果的可靠性。
4.可定制：“circRNA引物庫”已驗(yàn)證特異性引物達(dá)到20000多對，用戶可自由定制，靈活選擇，大大節(jié)約研究時(shí)間。
RIP實(shí)驗(yàn)是基于蛋白研究RNA-蛋白相互作用的技術(shù)，該技術(shù)是全基因組水平的檢測技術(shù)，適合體內(nèi)研究。
實(shí)驗(yàn)流程：
1.細(xì)胞裂解
2.捕獲RNA-蛋白復(fù)合物
3.洗脫
4.檢測
應(yīng)用[6]
circRNA FISH試劑盒可用于腫瘤的發(fā)生、發(fā)展和診斷的研究：
circRNA主要通過拮抗miRNA來發(fā)揮“海綿作用”進(jìn)而調(diào)控靶基因表達(dá),與多種疾病有著密切聯(lián)系,特別是在腫瘤中發(fā)揮重要作用。例如在circRNA在婦科惡性腫瘤中的研究中circRNA可以通過多種調(diào)控方式影響基因表達(dá),例如可負(fù)性調(diào)控miRNA表達(dá),也可與蛋白質(zhì)結(jié)合調(diào)控基因表達(dá),或可作為相應(yīng)疾病的診斷標(biāo)志物或潛在治療靶點(diǎn)。
參考文獻(xiàn)
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[5]MicroRNA-497 is a potential prognostic marker in human cervical cancer and functions as a tumor suppressor by targeting the insulin-like growth factor 1 receptor[J].Min Luo,Dongxiang Shen,Xiaoning Zhou,Xiaodong Chen,Wei Wang.Surgery.2013(6)
[6]康川川,賴鳳娣,徐玲,鐘佳寧,鐘田雨,謝曉英.circRNA在婦科惡性腫瘤中的研究進(jìn)展[J].贛南醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2018,38(12):1264-1268.