品名：Lightning-WB ? 3小時(shí)超快WB試劑盒，貨號(hào)：IF9999，品牌：Engibody

訂購(gòu)及技術(shù)咨詢：朱小鷗，13817407320(微信同號(hào))

NIH、麻省理工、哈佛、斯坦福等世界名校課題組青睞并長(zhǎng)期采購(gòu)的超快WB試劑盒！

3小時(shí)超快Western試劑盒

Lightning-WB? 試劑盒的五個(gè)巨大優(yōu)勢(shì)
1、本試劑盒適用于細(xì)菌、真菌、貼壁細(xì)胞、懸浮細(xì)胞、動(dòng)物組織及植物組織。 
 
2、本試劑盒適用于胞漿蛋白WB、膜蛋白WB、線粒體蛋白WB及核蛋白WB。
 
3、本試劑盒既適用于Flag/GFP等標(biāo)簽融合蛋白WB也適用于內(nèi)源性蛋白WB。
 
4、本試劑盒檢測(cè)目的蛋白的靈敏度極高，達(dá)到pg級(jí)，配合超靈敏ECL后可達(dá)fg級(jí)。
 
5、20分鐘細(xì)胞樣本裂解制備，30分鐘預(yù)制膠超快電泳，20分鐘超快轉(zhuǎn)印，10分鐘超快封閉，30分鐘抗體超快孵育。閃電一般的速度。
 
6、獨(dú)特配方試劑，無(wú)需購(gòu)置專門(mén)儀器，常規(guī)電泳儀、轉(zhuǎn)印儀即可無(wú)縫對(duì)接。

第一部分：試劑盒組分清單
（共計(jì)17個(gè)組分）

 
第二部分：背景簡(jiǎn)介及應(yīng)用場(chǎng)景
 
蛋白印跡WB
 
Western blotting (WB)是在蛋白質(zhì)凝膠電泳和固相免疫測(cè)定基礎(chǔ)上發(fā)展起來(lái)的蛋白質(zhì)檢測(cè)技術(shù)，是將SDS-PAGE凝膠電泳分離的非標(biāo)記蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到固相載體（NC膜，PVDF膜），再用特異性抗體對(duì)目的蛋白質(zhì)進(jìn)行鑒定及定量的分析技術(shù)，其檢測(cè)蛋白質(zhì)的靈敏度為pg級(jí)，甚至可以達(dá)到fg級(jí)，該技術(shù)廣泛應(yīng)用于醫(yī)學(xué)、生物學(xué)研究領(lǐng)域。
 
1、WB和ELISA，這兩種最經(jīng)典蛋白研究技術(shù)的區(qū)別是什么？
1)、ELISA用于定量，WB用于定性，也可以通過(guò)灰度分析做到半定量。
2)、WB的特異性比ELISA好。Western blotting 可以看到特異性的條帶，但是無(wú)法精確的絕對(duì)定量。 ELISA可以直接讀出濃度數(shù)值，但是如果抗體有非特異性結(jié)合，那得到的數(shù)值就不可靠。
3)、可開(kāi)展WB實(shí)驗(yàn)的靶標(biāo)蛋白種類是遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過(guò)ELISA的。
ELISA檢測(cè)蛋白一般采用雙抗夾心法，市面上可以選擇的所有ELISA試劑盒種類很有限，全球聞名的ELISA試劑盒金標(biāo)準(zhǔn)R&D公司經(jīng)過(guò)幾十年的開(kāi)發(fā)，也僅僅是開(kāi)發(fā)了幾千種蛋白的ELISA kit。但是WB就不同了，只要能找到一抗，就可以開(kāi)展WB實(shí)驗(yàn)，而一抗僅abcam一個(gè)公司就有十幾萬(wàn)種。覆蓋了科研中碰到的幾乎所有靶蛋白。
4)、由于兩種方法各有優(yōu)點(diǎn)，各有應(yīng)用場(chǎng)景，不能全面相互代替。
 
2、WB方法除了單獨(dú)使用外，還可以和哪些上游實(shí)驗(yàn)配合使用？ 
1)、上游可以是CoIP免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)，驗(yàn)證兩個(gè)已知蛋白有無(wú)相互作用，細(xì)胞內(nèi)蛋白互作，屬于In Vivo體內(nèi)互作。
 
2)、上游也可以是GST pull down實(shí)驗(yàn)，驗(yàn)證一個(gè)已知蛋白(GST融合表達(dá)蛋白)與其他蛋白有無(wú)相互作用，細(xì)胞外蛋白互作，屬于In Vitro體外互作。
GST Pull-down———GST 標(biāo)簽融合蛋白與獵物蛋白pull-down，In Vitro體外研究蛋白互作PPI的經(jīng)典方法。將目的蛋白序列加上GST或His標(biāo)簽序列進(jìn)行基因合成并構(gòu)建重組質(zhì)粒，轉(zhuǎn)化大腸桿菌后表達(dá)純化蛋白，再將GST 標(biāo)簽融合蛋白固定于GSH磁珠上作為誘餌蛋白，然后去拉取與之結(jié)合的獵物蛋白。
 
3)、在下列兩種情況下GST Pull-down是不可替代和不可或缺的：
A、誘餌蛋白找不到CoIP級(jí)的抗體，而GST Pull-down不需要CoIP級(jí)的免疫捕獲抗體，正好克服了這個(gè)難題。
B、目的蛋白所在的研究對(duì)象（比如真菌等）無(wú)法采用普通的標(biāo)簽質(zhì)粒轉(zhuǎn)染、轉(zhuǎn)化的方法進(jìn)行外源標(biāo)簽融合蛋白的過(guò)表達(dá)，也找不到內(nèi)源蛋白的抗體，這時(shí)便無(wú)法實(shí)施CoIP實(shí)驗(yàn)，因此GST Pull-down就是這類情況下研究蛋白互作的唯一選擇。
 
 
第三部分：技術(shù)原理和技術(shù)流程
 
技術(shù)原理：
 
蛋白質(zhì)印跡法 (WB) 是一種廣泛使用的基于抗體的技術(shù)，用于檢測(cè)細(xì)胞或組織提取物中的蛋白質(zhì)表達(dá)水平。這項(xiàng)技術(shù)借助抗體與目的蛋白的結(jié)合作用，測(cè)量生物樣品中的蛋白質(zhì)水平。
 
常規(guī)蛋白印跡實(shí)驗(yàn)步驟繁多且很耗時(shí)，為此，我們開(kāi)發(fā)了獨(dú)特配方的Quick-WB系列超快試劑，大大提高了實(shí)驗(yàn)速度，同時(shí)提供卓越的技術(shù)支持，以使您的蛋白印跡WB實(shí)驗(yàn)在一個(gè)下午即可獲得成功。
 
 
技術(shù)流程：
 
步驟一：待測(cè)樣本的準(zhǔn)備（組織、細(xì)胞、血清、滲出液等），選擇目的蛋白的經(jīng)過(guò)WB驗(yàn)證的抗體。
 
步驟二：蛋白質(zhì)樣本制備，根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求選擇制備總蛋白、膜蛋白、胞漿蛋白或核蛋白。
 
步驟三：SDS-PAGE凝膠電泳分離蛋白，將分離的蛋白轉(zhuǎn)移到固相支持載體（NC膜，PVDF膜）。
 
步驟四：目標(biāo)蛋白的免疫學(xué)檢測(cè)（抗體孵育，識(shí)別抗原），化學(xué)發(fā)光顯影蛋白條帶。
 
步驟五：蛋白條帶的定量分析，軟件工具（Image J等）測(cè)定灰度值。
 
 

第五部分：實(shí)驗(yàn)結(jié)果與示例展示

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