品名：Smart-antibody? Protein A抗體純化試劑盒，貨號(hào)：P4143，品牌：Engibody

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保姆級(jí)抗體純化試劑盒（Protein A法）

Smart-antibody?
Protein A抗體純化試劑盒的優(yōu)勢(shì)
 
1、本試劑盒可以純化來(lái)自腹水，血清，細(xì)胞培養(yǎng)物上清等樣本形式的抗體。
 
2、試劑盒中的Protein A純化填料可以重復(fù)使用10次以上，偶聯(lián)在瓊脂糖珠上的Protein A是純化人、兔、豬、狗或貓IgG（單克隆及多克?。┑睦硐脒x擇，高特異性，高穩(wěn)定性，高親和力，低配基脫落。
 
3、本試劑盒是一個(gè)Complete All-In-One Kit — 包含全部試劑及耗材，高效結(jié)合緩沖液、平衡緩沖液、洗滌緩沖液、洗脫緩沖液、中和液、protein A填料、重力空柱（帶控流閥）、脫鹽濃縮柱、抗體儲(chǔ)存液、以及下游WB檢測(cè)所需的高特異性山羊抗兔二抗（HRP標(biāo)記）。
 

第一部分：背景簡(jiǎn)介及應(yīng)用場(chǎng)景
 
Protein A、Protein G與抗體的結(jié)合特性比較
 
1、Protein A Agarose Resin 6FF、rProtein A Agarose Resin 6FF與抗體的結(jié)合
 
目前，約70-80%的抗體純化使用Protein A及Protein G親和層析。蛋白A (Protein A)來(lái)源于金黃色葡萄球菌的一個(gè)株系，它含有5個(gè)可以和抗體lgG分子的Fc段特異性結(jié)合的結(jié)構(gòu)域。蛋白A作為親和配基被偶聯(lián)到瓊脂糖基質(zhì)上，可以特異性的和樣品中的抗體分子結(jié)合，而使其他雜蛋白流穿，具有極高的選擇性，一步親和層析就可達(dá)到超過(guò)95%的純度。
 
天然的Protein A有5個(gè)IgG結(jié)合結(jié)構(gòu)域和未知功能的非Fc結(jié)合域，結(jié)構(gòu)示意圖如下：
 
此結(jié)構(gòu)的蛋白A大量結(jié)合IgG的同時(shí)，其非Fc結(jié)合域能結(jié)合部分雜蛋白，導(dǎo)致洗脫下來(lái)的IgG純度不夠，因此科學(xué)家利用基因工程的方法克隆Protein A的基因并進(jìn)行改造，得到重組型蛋白A，其非特異性結(jié)合明顯降低。重組的蛋白A經(jīng)過(guò)改造后在C端加入了一個(gè)半胱氨酸，可以定點(diǎn)偶聯(lián)到瓊脂糖珠上，降低空間位阻的同時(shí)提高IgG的結(jié)合能力。一步親和層析后樣品純度可超過(guò)95%。
 
但蛋白A與lgG的結(jié)合強(qiáng)度很大程度上依賴于該抗體的種屬和亞型，而其動(dòng)態(tài)結(jié)合能力則決定于結(jié)合強(qiáng)度(解離常數(shù))及流質(zhì)阻力等多種因素(例如上樣時(shí)樣品在柱內(nèi)的停留時(shí)間)。
本試劑盒中使用的即是優(yōu)化重組的蛋白A (rProtein A)偶聯(lián)的Agarose Resin 6FF
 
2、Protein G Agarose Resin 6FF與抗體的結(jié)合
 
蛋白G是一種源自鏈球菌G族的細(xì)胞表面蛋白，為三型Fc受體。其通過(guò)類似于蛋白A的非免疫機(jī)制與抗體的Fc段結(jié)合。像蛋白A一樣，蛋白G可以與IgG的Fc區(qū)域特異性結(jié)合，不同的是，Protein G可以更廣泛、更強(qiáng)地結(jié)合更多類型的lgG, 同時(shí)血清蛋白結(jié)合水平更低，純度更高，配基脫落也相對(duì)更低。此外，蛋白G還可以和某些抗體的Fab和F (ab)2段結(jié)合。
 
與蛋白G相比，蛋白A對(duì)兔、豬、狗和貓的IgG亞類提供了最高的結(jié)合能力。除IgG3外，蛋白A對(duì)人IgG也具有更高的結(jié)合能力，人IgG3結(jié)合較弱。另外，蛋白A與小鼠IgG1結(jié)合較弱，不推薦用于該抗體類型的大多數(shù)應(yīng)用。

Engibody品牌Protein A填料的優(yōu)勢(shì)：
貨號(hào)：P2108，品名：Protein A Agarose Resin 6FF
 
1、Protein A經(jīng)過(guò)了序列優(yōu)化并進(jìn)行了重組表達(dá)，protein A與瓊脂糖微球偶聯(lián)時(shí)用的是氨基酸序列C末端最后一個(gè)半胱氨酸（基因工程改造得到的），因?yàn)榘腚装彼嵩诘鞍仔蛄兄斜容^稀有，這樣可以基本實(shí)現(xiàn)把protein A定點(diǎn)定向偶聯(lián)到agarose beads上，使得agarose beads上的Protein A分子均處于有效的空間構(gòu)象，純化效率和親和力得到大大提升！
 
2、因其基質(zhì)的耐壓性（可耐受最高0.3 MPa的壓力），該產(chǎn)品可以用于工業(yè)大規(guī)模蛋白的純化，可在相對(duì)較高的流速下，實(shí)現(xiàn)對(duì)目的抗體的純化。
 
Protein A和Protein G對(duì)不同種屬和不同抗體亞型有不同的結(jié)合能力
需要根據(jù)這個(gè)表格來(lái)選擇適合目的抗體的純化填料
 

第二部分：技術(shù)原理
 
Protein A填料捕獲抗體分子的微觀示意圖

Protein A結(jié)合抗體分子CH2結(jié)構(gòu)域和CH3結(jié)構(gòu)域的交界部位
 

第三部分：技術(shù)流程

第四部分：結(jié)果展示
 
兔抗體血清經(jīng)過(guò)Protein A瓊脂糖填料純化后的SDS-PAGE檢測(cè)結(jié)果

 Purification of rabbit IgG using Protein A resin 6FF.
High purity and high capacity of Protein A resin 6FF.
 
5 mL rabbit serum was loaded on the column containing 0.5 mL settled Protein A resin 6FF. Bound immunoglobulin species were eluted with elution buffer (Neutralization buffer was added before). Fractions were analyzed by SDS-PAGE.
 
Lanes: (1) Raw rabbit serum; (2) Flow-through; (3) Elution. Note that, heavy and light chains of IgG were mostly absent from the flow-through, indicating that most immunoglobulins were bound to the column.

 

第五部分：抗體純化試劑盒組分清單
（共計(jì)10個(gè)組分，均可單獨(dú)購(gòu)買）
 

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