背景^[1-3]

RIPA裂解液(強)是一種經(jīng)典的細(xì)胞組織快速裂解液，主要用于從細(xì)胞中提取總蛋白。它含有多種成分，如Triton、SDS、NP-40等，這些成分能夠有效裂解細(xì)胞并釋放其中的蛋白質(zhì)。

RIPA裂解液（強）的裂解強度大于NP-40裂解液和中強度的RIPA裂解液，因此它可以更有效地從細(xì)胞中提取蛋白質(zhì)。所獲得的蛋白質(zhì)可用于多種下游實驗，如Western Blot、免疫沉淀（Immunoprecipitation,IP）等。

具體來說，RIPA裂解液（強）的主要成分包括50mM Tris（pH 7.4）、150mM NaCl、1%Triton X-100、1%sodium deoxycholate、0.1%SDS，以及sodium orthovanadate、sodium fluoride、EDTA、leupeptin等多種抑制劑。這些抑制劑可以有效抑制蛋白的降解，并維持原有的蛋白間相互作用，從而確保提取的蛋白質(zhì)的質(zhì)量和穩(wěn)定性。

RIPA裂解液(強)

由于RIPA裂解液（強）含有較高濃度的去垢劑，因此不能使用Bradford法測定由本裂解液裂解得到樣品的蛋白濃度。此外，這種裂解液不僅適用于動物和植物的細(xì)胞或組織樣品，還可以用于真菌或細(xì)菌樣品。

在使用RIPA裂解液（強）時，建議遵循產(chǎn)品說明書或相關(guān)實驗指南進行操作，以確保實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。同時，實驗過程中也應(yīng)注意安全操作，避免交叉污染和其他安全問題。

應(yīng)用^[4-5]

RIPA裂解液(強)可以用于CTP-FoxM1抗原負(fù)載的DC疫苗對小鼠FoxM1陽性肝癌皮下模型的免疫治療效應(yīng)

體外培養(yǎng)Hepa1-6小鼠肝癌細(xì)胞株,了解FoxM1作為腫瘤抗原在該細(xì)胞株中蛋白的表達水平,探討Hepa1-6細(xì)胞用于小鼠Fox M1陽性肝癌皮下模型建立的可能性;摸索Hepa1-6細(xì)胞建立C57BL/6小鼠FoxM1陽性皮下肝癌的最佳條件;并探討CTP-FoxM1負(fù)載的DC疫苗對小鼠FoxM1陽性皮下肝癌的免疫治療作用。

方法:在37℃、5%CO2孵箱中,采用含有10%胎牛血清的DMEM高糖培養(yǎng)基(1%青鏈霉素)培養(yǎng)小鼠肝癌細(xì)胞株Hepa1-6,收集對數(shù)生長期Hepa1-6肝癌細(xì)胞,RIPA裂解液(強)提取Hepa1-6細(xì)胞總蛋白,western blot方法鑒定FoxM1在小鼠肝癌細(xì)胞系Hepa1-6中的表達水平。于C57BL/6小鼠右脅腹皮下注射濃度分別5x106/ml、1x107/ml、3x107/ml的Hepa1-6細(xì)胞0.1ml,觀察小鼠皮下腫瘤生長情況并每兩天測量瘤體體積,繪制皮下肝癌的生長曲線,摸索小鼠皮下成瘤的最適條件;HE染色鑒定皮下腫瘤組織,同時Western blot檢測腫瘤組織中FoxM1的表達情況。以濃度為1ug/ml的融合蛋白CTP-FoxM1轉(zhuǎn)導(dǎo)DC48h制成疫苗,注射于荷瘤小鼠左脅腹皮下,測量并記錄小鼠皮下肝癌瘤體的變化情況,病理檢查確定腫瘤在肺、肝、脾等臟器的轉(zhuǎn)移情況,ELISA試劑盒檢測小鼠血清中TNF-α、IFN-γ、IL-2的分泌水平,最終評估ctp-foxm1負(fù)載的dc疫苗對小鼠皮下肝癌的免疫治療效應(yīng)。此外,我們還采用elisa方法檢測了78例phc患者血清中cxcl13的表達情況,回顧性分析患者臨床病理特征和實驗室檢查指標(biāo)并探討cxcl13在肝癌中臨床意義。

結(jié)果:hepa1-6小鼠肝癌細(xì)胞中高表達foxm1,可以用來建立foxm1陽性小鼠皮下肝癌模型。以3x107/ml濃度的hepa1-6細(xì)胞0.1ml荷瘤c57bl/6小鼠,建模時間短、成功率較高,he染色多見病理性核分裂,腫瘤內(nèi)微血管豐富,與臨床hcc類似,為觀察后續(xù)dc疫苗在小鼠體內(nèi)的的抗腫瘤免疫效應(yīng)奠定了基礎(chǔ)。ctp-foxm1抗原負(fù)載的dc疫苗治療hepa1-6肝癌細(xì)胞荷瘤小鼠,小鼠腫瘤生長受到抑制,且與ctp、foxm1、pbs負(fù)載的dc疫苗對照組相比,皮下瘤體積和腫瘤重量均更小,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。ctp-foxm1組小鼠血清中細(xì)胞因子ifn-γ、il-2的表達量與其他組無統(tǒng)計學(xué)差異(p>0.5),he病理檢查正常低表達foxm1的小腸未發(fā)現(xiàn)炎癥以及組織損傷。原發(fā)性肝癌患者血清cxcl13表達水平明顯高于健康人,并且與腫瘤大小、轉(zhuǎn)移、tnm分期密切相關(guān)。

參考文獻

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