背景技術(shù)

自正式確定非典型肺炎的病原體為SARS冠狀病毒以來，對(duì)于非典型肺炎及其病原體的防治和研究取得了極大進(jìn)展，抗SARS冠狀病毒藥物和疫苗研制工作也在全力進(jìn)行。SARS病毒是一種新型的冠狀病毒，具有較強(qiáng)的傳染性和變異性。目前SARS還缺乏特效的治療，目前的治療包括抗病毒治療如利巴韋林，血清療法等，用激素降低免疫系統(tǒng)對(duì)肺的損傷，用抗生素治療潛在的細(xì)菌感染，辨證的中西醫(yī)結(jié)合治療；呼吸機(jī)的應(yīng)用以及應(yīng)激和ARDS的對(duì)癥支持治療等?？筍ARS藥物研制目前尚處于初期階段。

國(guó)內(nèi)外多家實(shí)驗(yàn)室用各種方式在不同水平正進(jìn)行著抗SARS病毒藥物的篩選工作。國(guó)內(nèi)軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院研制的ω干擾素作為一種輔助性治療SARS藥物已通過鑒定，中國(guó)科學(xué)院上海藥物研究所以非典病毒E蛋白、N蛋白和(3CL)蛋白水解酶作藥靶，初步篩選到可能有抗SARS病毒活性的藥物19種，但是尚未見到有明確抗SARS病毒藥物的體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)結(jié)果報(bào)道。千金藤素為米黃色粉末，經(jīng)圖譜(紅外、紫外、核磁、質(zhì)譜)分析結(jié)果證明符合分子式C37H38N2O6，分子量為606.686，用非水滴定法測(cè)定純度達(dá)95％以上。本品易溶于氯仿、甲醇、乙醇，不溶于水。臨床上主要用于防治腫瘤患者因放、化療及其它原因所致的白細(xì)胞減少癥，是從防己科千金藤屬(Stephanialour)植物中提取分離出來的生物堿。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)存在的缺陷，提供千金藤素在制備抗SARS病毒藥物中的應(yīng)用。

本發(fā)明是以千金藤素為有效成分制備抗SARS病毒藥物，可采用常規(guī)的制備工藝，制備成不同的藥物劑型供患者使用，如制成口服液、膠囊、粉劑、針劑等。

藥物注射液的用法與用量：通常成人，一次50mg，一日一次，(與250ml 5％葡萄糖液混勻后，也可不加葡萄糖。)緩緩靜脈滴注。

(1)以千金藤素為有效成分制備的抗SARS病毒藥物作用如下：1、藥物對(duì)細(xì)胞的保護(hù)作用以不同濃度藥物加到長(zhǎng)滿單層用于體外培養(yǎng)SARS病毒的Vero-E6細(xì)胞株Vero-E6細(xì)胞的96孔板中，培養(yǎng)2h后棄藥液，接種100TCID50的SARS-CoV病毒液，37℃吸附5％CO2培養(yǎng)48h，觀察藥物處理后的細(xì)胞對(duì)SARS-CoV感染的影響。同時(shí)做單用病毒感染時(shí)的病毒對(duì)照、正常細(xì)胞對(duì)照。結(jié)果顯示：在Vero-E6細(xì)胞上的無毒濃度為10μg/mL。

(2)藥物對(duì)SARS-CoV的直接殺傷作用含不同濃度藥物的維持液與等量病毒液后，置37℃作用2h后，將孵育液加入長(zhǎng)滿單層Vero-E6細(xì)胞的96孔板中，0.1ml/孔，37℃吸附1h，換上含相應(yīng)濃度藥物的維持液，繼續(xù)培養(yǎng)48h，觀察藥物對(duì)SARS-CoV的直接殺傷作用。結(jié)果顯示：不同濃度藥物與病毒等量混合2h后，在10μg/ml時(shí)對(duì)細(xì)胞感染SARS-CoV皆有全抑制作用。

(3)藥物對(duì)SARS-CoV感染細(xì)胞的綜合作用藥物和病毒等量混合后直接加到長(zhǎng)滿單層Vero-E6細(xì)胞的96孔板上37℃吸附2h，棄混合液加維持液，繼續(xù)培養(yǎng)4gh，觀察藥物對(duì)SARS-CoV感染細(xì)胞的綜合作用。結(jié)果顯示：千金藤素對(duì)SARS-CoV感染細(xì)胞的綜合作用效果為：8ug/ml有抑制作用，濃度為10ug/ml時(shí)，對(duì)SARS-CoV病毒有100％的抑制效果。

(4)藥物對(duì)病毒感染細(xì)胞的預(yù)防作用不同濃度藥物預(yù)先與細(xì)胞作用2h后，接種病毒，千金藤素在10μg/mL時(shí)可以66％抑制SARS病毒感染的Vero-E6細(xì)胞病變。

(5)藥物對(duì)病毒感染細(xì)胞的治療作用千金藤素在10μg/ml時(shí)對(duì)細(xì)胞感染SARS-CoV有全部抑制作用。

本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比具有如下優(yōu)點(diǎn)：1、在安全劑量范圍內(nèi)，對(duì)SARS病毒的抑制率高。

2、有較強(qiáng)的預(yù)防SARS病毒感染的作用。

3、愈后快，可以減輕感染病人的綜合癥狀。

4、藥物毒性小，穩(wěn)定性好，耐藥性強(qiáng)。

具體實(shí)施方式

實(shí)驗(yàn)材料：受試藥物是千金藤素，實(shí)驗(yàn)時(shí)用生理鹽水配成混懸液，供實(shí)驗(yàn)用。

2、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物  昆明種小鼠，體重(20±2)g；Wistar大鼠，體重(270±20)g；C57BL/6小鼠，體重(20±2)g。

3、經(jīng)口灌胃給藥的急、慢性毒性試驗(yàn) 

①對(duì)小鼠急性毒性(LD50)及耐受量測(cè)定試驗(yàn)：取預(yù)先空腹12h的動(dòng)物30只，隨機(jī)分為3組，每組10只，各劑量組間間距為0.85。將千金藤素分別配成濃度為(2.0，1.7，1.4％)，然后給動(dòng)物0.4ml·10g-1體重，1次ig，劑量為800mg·kg-1，觀察1周，所有動(dòng)物一般情況良好，無任何毒性反應(yīng)及死亡。在此基礎(chǔ)上進(jìn)行1天內(nèi)耐受量試驗(yàn)；另取動(dòng)物20只，雌雄各半，禁食(不禁水)12h，然后按上法給動(dòng)物1天2.0％的濃度ig兩次，總量達(dá)1600mg·kg-1，，相當(dāng)于人用量1.0mg·kg-1的1000倍以上，僅有少數(shù)動(dòng)物出現(xiàn)少動(dòng)，停止飲水和進(jìn)食，持續(xù)2～3h后，即恢復(fù)正常，無動(dòng)物死亡。表明，千金藤素對(duì)昆明種小鼠ig途徑給藥的耐受劑量為1600mg·kg-1。

②對(duì)大鼠的長(zhǎng)期毒性實(shí)驗(yàn)：取大鼠60只，隨機(jī)分為3組，每組20只，雌雄各半。(a)對(duì)照組：NS，20ml·kg-1，ig；(b)和(c)組為千金藤素組，劑量分別為40，80mg·kg-1，ig(相當(dāng)于人用量的40，80倍)，每日1次，連用60d，ig；給藥。在用藥期間每日觀察動(dòng)物一般情況(活動(dòng)、毛發(fā)、食量、大便等)，每10d稱1次體重；在用藥30d及60d時(shí)測(cè)定血象(白細(xì)胞總數(shù)及分類，血小板、紅細(xì)胞、血色素)，肝腎功能，試驗(yàn)結(jié)束，處死各組部分動(dòng)物，剖取主要臟器(心、肺、肝、脾、腎、腸、胃、睪丸、子宮)進(jìn)行病理組織學(xué)檢查。其結(jié)果為各組所有動(dòng)物一般情況良好；大劑量組動(dòng)物體重增長(zhǎng)較慢，而對(duì)血象、肝腎功能及各主要臟器的病理組織學(xué)均無明顯影響，與對(duì)照組相比，無差異。