簡(jiǎn)述

軟骨素硫酸鹽又名硫酸軟骨素（分子式：C₁₃H₂₁NO₁₆S，分子量為479.368），是從動(dòng)物軟骨中提取的硫酸軟骨素A，和C等酸性粘多糖的混合物。該物質(zhì)呈白色或淡黃色粉末狀，無味，無臭，有吸濕性，易溶于水而呈粘度較大的溶液，不溶于乙醇，丙酮和乙醚等有機(jī)溶劑中，其鹽類對(duì)熱較穩(wěn)定[1]。

以牛鼻軟骨為原料，采用增大堿濃度提取，復(fù)合酶水解及濃縮后酒精沉淀的方法實(shí)現(xiàn)軟骨素硫酸鹽的生產(chǎn)，在最佳實(shí)驗(yàn)條件下，得到軟骨素硫酸鹽為白色粉末，其純度達(dá)95.2%，收率為32.6%，可有效提高產(chǎn)品純度和收率，值得推廣應(yīng)用[2]。

測(cè)定方法

間苯三酚分光光度法

利用含有間苯三酚的無機(jī)酸與樣品中軟骨素硫酸鹽反應(yīng)生成肯色產(chǎn)物進(jìn)行分光光度分析。結(jié)果：100℃反應(yīng)30min在波長(zhǎng)558nm處測(cè)定軟骨素硫酸鹽，在0.10~1.0mg/ml范圍內(nèi)線性關(guān)系良好(r=0.9993)，具有較好重現(xiàn)性。此法操作簡(jiǎn)便，結(jié)果準(zhǔn)確[3]。

天青A分光光度法

利用軟骨素硫酸鹽與天青A作用后，其復(fù)合物溶液在625 nm處吸光值與軟骨素硫酸鹽濃度成線性關(guān)系的特點(diǎn)，建立一種測(cè)定中藥復(fù)方樣品中軟骨素硫酸鹽含量的快速，簡(jiǎn)便，靈敏的分光光度法。該方法在0～30 μg*mL^-1范圍內(nèi)呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系(R=0.999)，回收率范圍為97.4%～103.8%[4]。

藥理活性研究

軟骨素硫酸鹽主要應(yīng)用于關(guān)節(jié)炎、滴眼液等，具有止痛，促進(jìn)軟骨再生的功效，對(duì)改善老年退行性關(guān)節(jié)炎、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎有一定的效果，可以改善關(guān)節(jié)問題。此外，研究還發(fā)現(xiàn)，它可促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖，抑制其轉(zhuǎn)移。

為了觀察軟骨素硫酸鹽對(duì)阿霉素作用下HL60細(xì)胞增殖分化的影響，設(shè)計(jì)開放性實(shí)驗(yàn)，方法如下：

①細(xì)胞傳代培養(yǎng)后將進(jìn)入對(duì)數(shù)增殖期的細(xì)胞用含體積分?jǐn)?shù)0.1滅活胎牛血清的RPMI1640培養(yǎng)液配制成1×10⁸L^-1的細(xì)胞懸液，分裝于45個(gè)培養(yǎng)瓶中，4mL/瓶。

②取分裝好的細(xì)胞懸液15瓶，按照0，5，25，50，75mg/L濃度加入軟骨素硫酸鹽，每個(gè)濃度平行3瓶，空白對(duì)照組加入等量的0.01mol/L磷酸鹽緩沖液。采取細(xì)胞計(jì)數(shù)法測(cè)定軟骨素硫酸鹽處理后的HL60細(xì)胞密度的變化。

③取分裝好的細(xì)胞懸液30瓶，分為軟骨素硫酸鹽+阿霉素組，軟骨素硫酸鹽組，各15瓶。按照0，5，25，50，75mg/L濃度向兩組加入軟骨素硫酸鹽，每個(gè)濃度平行3瓶，空白對(duì)照組加入等量的0.01mmol/L磷酸鹽緩沖液。用MTT法測(cè)定軟骨素硫酸鹽處理后的HL60細(xì)胞加入阿霉素后細(xì)胞存活率的變化。

④取分裝好的細(xì)胞懸液15瓶，按照0，5，25，50，75mg/L濃度加入軟骨素硫酸鹽，每個(gè)濃度平行3瓶，空白對(duì)照組加入等量的0.01mol/L磷酸鹽緩沖液。用酶聯(lián)免疫反應(yīng)測(cè)定各組細(xì)胞的酸性磷酸酶活性，觀察其對(duì)細(xì)胞分化的影響。

主要觀察指標(biāo)：①軟骨素硫酸鹽對(duì)HL60細(xì)胞增殖的影響；②軟骨素硫酸鹽+阿霉素對(duì)HL60細(xì)胞存活率的影響；③軟骨素硫酸鹽對(duì)HL60細(xì)胞酸性磷酸酶活性的影響。

結(jié)果：①與空白對(duì)照組比較，不同濃度軟骨素硫酸鹽處理24h后HL60細(xì)胞密度均顯著升高(P0.01)；且50，75mg/L軟骨素硫酸鹽濃度組的細(xì)胞密度升高尤為明顯，但兩組間比較基本相似(P0.05)，說明在這個(gè)濃度范圍內(nèi)硫酸軟骨素對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)的促進(jìn)作用變化不大。②與空白對(duì)照組比較，加入不同濃度軟骨素硫酸鹽后，軟骨素硫酸鹽+阿霉素組細(xì)胞存活率均有不同程度的降低，軟骨素硫酸鹽濃度超過25mg/L時(shí)降低明顯(P0.01)。③與空白對(duì)照組比較，5，25，50mg/L軟骨素硫酸鹽濃度組HL60細(xì)胞酸性磷酸酶吸光度值均明顯升高(1.268±0.038，1.305±0.101，1.321±0.021，1.354±0.013，P0.01或0.05)，尤其是75mg/L軟骨素硫酸鹽濃度組HL60細(xì)胞酸性磷酸酶吸光度值高達(dá)1.406±0.113，與空白對(duì)照組比較差異有極顯著意義(P0.001)。

故可得出結(jié)論，軟骨素硫酸鹽在適當(dāng)濃度時(shí)對(duì)HL60細(xì)胞的增殖產(chǎn)生促進(jìn)作用，可提高HL60細(xì)胞對(duì)阿霉素的敏感性，促進(jìn)細(xì)胞分化[5]。

參考文獻(xiàn)

[1]張良才.硫酸軟骨素含量測(cè)定乙二胺四乙酸二鈉鹽絡(luò)和法[J].中國(guó)生化藥物雜志, 1982(04):28-30.DOI:CNKI:SUN:SHYW.0. 1982-04- 007.

[2]高華,劉坤,于茲東,等.硫酸軟骨素生產(chǎn)新工藝研究[J].青島大學(xué)學(xué)報(bào)：工程技術(shù)版, 2003, 18(4):4.DOI:10.3969/j.issn.1006-9798.2003.04.013.

[3]高華,劉坤,于茲東,等.間苯三酚分光光度法測(cè)定硫酸軟骨素的研究[J].中國(guó)生化藥物雜志, 2000, 21(5):2.DOI:10.3969/j.issn.1005-1678.2000.05.012.

[4]高貴珍,焦慶才,丁一磊,等.天青A分光光度法測(cè)定硫酸軟骨素含量的研究[J].光譜學(xué)與光譜分析, 2003, 23(3):600-602.DOI:10.3321/j.issn:1000-0593.2003.03.051.

[5]徐文華,虞浩,張銀亭,et al.硫酸軟骨素對(duì)HL60細(xì)胞增殖分化的影響[J].中國(guó)臨床康復(fù), 2006, 10(37):166-168.DOI:10.3321/j.issn:1673-8225.2006.37.039.