背景[1-3]
膽鹽乳糖培養(yǎng)基(BL)用途:用于藥品和生物制品中大腸桿菌,沙門氏菌和綠膿桿菌的增菌培養(yǎng)。
原理：
胨提供碳氮源；乳糖是可發(fā)酵的糖類；氯化鈉維持均衡的滲透壓；磷酸氫二鈉和磷酸二氫鉀為緩沖劑；牛膽鹽和去氧膽酸鈉為選擇性抑菌劑。
成分(g/L)：蛋白胨20.0；乳糖5.0；牛膽鹽2.0；氯化鈉5.0；磷酸氫二鉀4.0；磷酸二氫鉀1.3
pH值7.4±0.2 25℃
使用方法：
1、稱取本品35.8g，加入蒸餾水或去離子水1 L，攪拌加熱煮沸至完全溶解，分裝三角瓶，每瓶100mL，121℃20min，待冷至常溫后，備用。
2、樣品的處理。
3、取膽鹽乳糖增菌液3份，2份分別加入規(guī)定量的供試液，其中一份加入對(duì)照菌50～100個(gè)作陽(yáng)性對(duì)照，第三份加入與供試液等量的稀釋液作陰性對(duì)照。
4、將三角瓶放入30～35℃恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)18～24h。必要時(shí)可延長(zhǎng)至48h。
5、觀察結(jié)果。陽(yáng)性對(duì)照應(yīng)生長(zhǎng)良好，陰性對(duì)照應(yīng)無(wú)菌生長(zhǎng)。
應(yīng)用[4][5]
用于乳品中大腸菌群快速檢測(cè)研究
以國(guó)標(biāo)法中乳糖膽鹽發(fā)酵培養(yǎng)基為基本營(yíng)養(yǎng)成分,分別研究構(gòu)建了檢測(cè)片法和細(xì)胞培養(yǎng)瓶劑法,并對(duì)模擬條件下的可逆性損傷大腸桿菌進(jìn)行了復(fù)蘇實(shí)驗(yàn)研究。為探索適合乳品中大腸菌群快速檢測(cè)的方法和提高檢出率打下研究基礎(chǔ)。
(1) 建立了乳品中大腸菌群檢測(cè)片快速檢測(cè)方法,以國(guó)標(biāo)法中的乳糖發(fā)酵管培養(yǎng)基為基本營(yíng)養(yǎng)成分,遴選、優(yōu)化、添加輔助營(yíng)養(yǎng)成分、酸堿指示劑、顯色劑、緩沖劑、修復(fù)劑、選擇性抑菌劑,通過(guò)冷水凝膠劑等均勻固化于基片上。樣品滴加檢測(cè)片上,培養(yǎng)16～18 h即可直接依據(jù)檢測(cè)片顏色的變化定量檢樣中大腸菌群的含量,結(jié)果既可用cfu/mL報(bào)告,也可以MPN形式報(bào)告。
優(yōu)化后的(a)鮮乳檢測(cè)片配方(g.L-1)：胰蛋白胨10.0,大豆蛋白胨5.0,乳糖15.0,SDS 0.1,磷酸氫二鉀4.0,氯化鈉3.0,聚丙烯酸鈉1.0,質(zhì)量濃度為2%的TTC溶液5 mL,質(zhì)量濃度為1.6g/100mL溴甲酚紫溶液4 mL,蒸餾水1000 mL；(b)酸乳檢測(cè)片配方(g.L-1)：胰蛋白胨10.0,大豆蛋白胨5.0,乳糖15.0,SDS 0.1,磷酸氫二鉀20.0,氯化鈉3.0,聚丙烯酸鈉1.0,質(zhì)量分?jǐn)?shù)為2%的TTC溶液5 mL,質(zhì)量濃度為1.6 g/100mL溴甲酚紫溶液4 mL,蒸餾水1000 mL。
檢測(cè)片對(duì)標(biāo)準(zhǔn)大腸桿菌等7株菌株和市售乳制品樣本進(jìn)行測(cè)試,結(jié)果表明,檢測(cè)片上的紅色菌落清晰明顯,菌落周圍黃暈顏色深淺適宜,檢測(cè)結(jié)果重復(fù)性強(qiáng),靈敏度高,最低檢出限為0～4cfu/mL,報(bào)告結(jié)果可在18 h內(nèi)完成。
實(shí)際使用檢測(cè)片法和國(guó)標(biāo)法對(duì)鮮乳、酸乳、奶粉各20份樣本進(jìn)行大腸菌群檢測(cè),兩方法所測(cè)結(jié)果的總符合率為96.7%,檢測(cè)結(jié)果經(jīng)χ2檢驗(yàn),χ2=0.5<χ20.05(1),P>0.05,表明兩方法檢出的陽(yáng)性率在統(tǒng)計(jì)學(xué)上無(wú)顯著性差異。
(2) 研究了一種用于快速檢測(cè)大腸菌群的細(xì)胞培養(yǎng)瓶劑法,即以國(guó)標(biāo)法中的乳糖膽鹽發(fā)酵培養(yǎng)基為營(yíng)養(yǎng)成分,經(jīng)濃縮、干燥后制成快速檢測(cè)瓶劑,以遴選的3.5 mol/LNaOH配制的百里香酚酞溶液作為產(chǎn)氣指示劑,并將其制成1×1cm規(guī)格產(chǎn)氣指示試紙。
樣品滴加細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi),培養(yǎng)24 h,依據(jù)培養(yǎng)瓶蓋上產(chǎn)氣指示試紙顏色變化及瓶?jī)?nèi)溶液顏色變化,確定可疑陽(yáng)性樣品,并對(duì)其進(jìn)行氧化酶實(shí)驗(yàn)及鏡檢,驗(yàn)證大腸菌群的存在性。
實(shí)驗(yàn)對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)瓶法進(jìn)行了大腸菌群的重復(fù)性及實(shí)際樣品檢測(cè),并與國(guó)標(biāo)法進(jìn)行了比較,結(jié)果顯示,細(xì)胞培養(yǎng)瓶法與國(guó)標(biāo)法所測(cè)結(jié)果符合率達(dá)96%,樣品檢測(cè)報(bào)告時(shí)間只需24 h,兩種方法所測(cè)結(jié)果在統(tǒng)計(jì)學(xué)上無(wú)顯著性差異(P>0.05)。
參考文獻(xiàn)
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