背景及概述^[1][2]

(D-ALA2)-亮氨酸腦啡肽在人體分布廣泛，有著極其重要的生理功能。其不僅在對(duì)腦細(xì)胞具有獨(dú)特的作用，能夠激活處于沉睡狀態(tài)的腦細(xì)胞，對(duì)因腦損傷導(dǎo)致的后遺癥有很好的恢復(fù)作用;在免疫功能方面起著重要的作用，包括增加免疫系統(tǒng)、T 淋巴細(xì)胞、NK 細(xì)胞、巨噬細(xì)胞等的活性、抗病毒、增加γ-干擾素釋放等；可以活化的免疫細(xì)胞促使內(nèi)分泌細(xì)胞分泌的方式參與免疫調(diào)節(jié)，進(jìn)而對(duì) DNA 的基因調(diào)控和表達(dá)功能產(chǎn)生影響。

測(cè)定方法^[2]

夏宇沁等人建立了一種新型的氧化還原柱前衍生化熒光檢測(cè)高效液相色譜法測(cè)定(D-ALA2)-亮氨酸腦啡肽藥物。方法將(D-ALA2)-亮氨酸腦啡肽與0.012mol/L高碘酸鈉、0.01mol/L兒茶酚、0.3mol/L硼酸按體積比2∶2∶1∶1混合,于120℃反應(yīng)10min后,用反相柱分離,以0.25mol/L硼酸鹽緩沖液(pH 7.6)和甲醇為流動(dòng)相,采用梯度洗脫,熒光檢測(cè)器檢測(cè)。同時(shí)與高效液相色譜紫外法、鄰苯二甲醛(O-phthalaldehyde,OPA)柱前衍生熒光檢測(cè)高效液相色譜法比較,測(cè)定體外及血樣中L-EK的含量。

結(jié)果氧化還原柱前衍生化熒光檢測(cè)高效液相色譜法檢測(cè)含(D-ALA2)-亮氨酸腦啡肽血樣,線性范圍0.5～50.0mg/L,線性良好(r=0.999 8),血漿中檢測(cè)限為0.1mg/L,且較另外兩種方法不受內(nèi)源性物質(zhì)的干擾。結(jié)論新型的氧化還原柱前衍生化熒光檢測(cè)高效液相色譜法專屬性好,靈敏度高,尤其適合生物樣品中(D-ALA2)-亮氨酸腦啡肽藥物的測(cè)定。

主要參考資料

[1] 方娉婷. Fmoc固相法合成亮氨酸腦啡肽[C]. 河南省化學(xué)會(huì).河南省化學(xué)會(huì)2010年學(xué)術(shù)年會(huì)論文摘要集.河南省化學(xué)會(huì):河南省化學(xué)學(xué)會(huì),2010:362.

[2] 夏宇沁,陸燁,劉家池,梁建英.一種測(cè)定亮氨酸腦啡肽(L-EK)藥物的新型熒光衍生化方法[J].復(fù)旦學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版),2012,39(03):301-304.