pRb-TA-luc (報(bào)告基因質(zhì)粒)
pRb-TA-luc (報(bào)告基因質(zhì)粒)是信裕生物自行研發(fā)的用于檢測Rb(retinoblastoma protein)轉(zhuǎn)錄抑制活性水平的報(bào)告基因質(zhì)粒。pRb-TA-luc是以信裕生物的pGL6-TA質(zhì)粒為模板，在其多克隆位點(diǎn)插入了多個(gè)Rb結(jié)合位點(diǎn)，可以高靈敏度地檢測Rb的轉(zhuǎn)錄抑制活性水平。Rb可以和E2F等轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合，抑制這些轉(zhuǎn)錄因子的激活，抑制細(xì)胞周期的進(jìn)展。Rb同時(shí)也可以作為一個(gè)抑制性轉(zhuǎn)錄因子直接結(jié)合到其響應(yīng)的順式作用元件，抑制該基因的轉(zhuǎn)錄。
pGL6-TA質(zhì)粒是用于在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中進(jìn)行螢火蟲螢光素酶(firefly luciferase)報(bào)告基因檢測的新一代質(zhì)粒。該報(bào)告基因質(zhì)粒比Promega公司的pGL3系列有了全面的改進(jìn)，一方面對于luciferase的編碼進(jìn)行了改進(jìn)，確保能更好地在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中進(jìn)行表達(dá)，同時(shí)對整個(gè)質(zhì)粒中所有可以被預(yù)測出的可能的轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn)全部進(jìn)行了適當(dāng)?shù)耐蛔兲幚?，在保持原有功能不變的情況下，使各種轉(zhuǎn)錄因子在質(zhì)粒上的非特異性結(jié)合降到最低。
螢光素、螢光素酶、螢火蟲螢光素酶和海腎螢光素酶也經(jīng)常被稱作熒光素、熒光素酶、螢火蟲熒光素酶和海腎熒光素酶。
pRb-TA-luc質(zhì)粒的主要信息如下：
Rb response element
32-91
Minimal TA promoter (pTA)
114-136
luc2 reporter gene
178-1830
SV40 late poly(A) signal
1865-2086
SV40 early enhancer/promoter
2134-2552
Synthetic neomycin phosphotransferase(Neor) coding region
2577-3371
Synthetic poly(A) signal
3396-3444
Reporter Vector primer 4 (RVprimer4) binding region
3511-3530
ColE1-derived plasmid replication origin
3768
Synthetic Beta-lactamase (Ampr) coding region
4559-5419
Synthetic poly(A) signal/transcriptional pause site
5524-5677
Reporter Vector primer 3 (RVprimer3) binding region
5626-5645
pRb-TA-luc質(zhì)粒的圖譜如下：
pRb-TA-luc的多克隆位點(diǎn)及Rb response element的詳細(xì)圖譜如下：
BglI KpnI NheI XhoI Rb response elememt
1
GGCCTAACTG
GCCGGTACCG
CTAGCCTCGA
CACCCCTCTG
CCGGATTGAC
CGGCCATGGC
GATCGGAGCT
GTGGGGAGAC
Rb response elememt BglII
51
GCGCCACCGT
GCCCGCGCGC
CACCCCTCTG
GCGCCACCGT
CGCGGTGGCA
CGGGCGCGCG
GTGGGGAGAC
CGCGGTGGCA
HindIII Minimal TA promoter
101
GAAGCTTAGA
TATATAATGG
TCCAGCTTGG
CTTCGAATCT
ATATATTACC
AGGTCGAACC
pRb-TA-luc中沒有的酶切位點(diǎn)(Restriction enzymes that do not cut pRb-TA-luc)包括：
Aat II
Afl II
Asc I
Ase I
Bsa I
BsaA I
BsiW I
BspM II
Eco72 I
EcoR I
EcoR V
Mlu I
Nde I
Nru I
PflM I
Pme I
Pml I
Psp1406 I
PspA I
Rsr II
Sac I
Sma I
SnaB I
Spl I
Srf I
Tth111 I
Vsp I
Xcm I
Xma I
Xmn I
pRb-TA-luc中的單酶切位點(diǎn)(Restriction enzymes that cut pRb-TA-luc once)包括：
Sfi I
GGCCN,NNN`NGGCC
9
EcoN I
CCTNN`N,NNAGG
3052
Bgl I
GCCN,NNN`NGGC
9
BsiC I
TT`CG,AA
3447
Acc65 I
G`GTAC,C
15
BstB I
TT`CG,AA
3447
Asp718
G`GTAC,C
15
Sal I
G`TCGA,C
3461
Kpn I
G,GTAC`C
19
Afl III
A`CRYG,T
3711
Nhe I
G`CTAG,C
21
ApaL I
G`TGCA,C
4025
PaeR7 I
C`TCGA,G
27
HgiE II
ACCNNNNNNGGT -1/13
4290
Xho I
C`TCGA,G
27
Not I
GC`GGCC,GC
4531
Bgl II
A`GATC,T
93
BstE II
G`GTNAC,C
4558
Hind III
A`AGCT,T
103
Ahd I
GACNN,N`NNGTC
4633
BsrG I
T`GTAC,A
669
Bsu36 I
CC`TNA,GG
4989
Dra III
CAC,NNN`GTG
1325
Pvu I
CG,AT`CG
5003
Gsu I
CTGGAG 21/19
1558
Sac II
CC,GC`GG
5027
Bpm I
CTGGAG 22/20
1559
Bst1107 I
GTA|TAC
5143
Apo I
R`AATT,Y
1941
Xca I
GTA|TAC
5143
Mun I
C`AATT,G
2005
Spe I
A`CTAG,T
5462
BamH I
G`GATC,C
2098
BsmA I
GTCTC`/9
5474
Stu I
AGG|CCT
2531
BsmB I
CGTCTC 7/11
5475
pRb-TA-luc質(zhì)粒中推薦使用的測序引物序列如下：
RVprimer3(5626-5645):
CTA GCA AAA TAG GCT GTC CC
pRb-TA-luc的全序列信息：d2248-pRb-TA-luc-seq.txt
包裝清單：
KL-2248-1μg
pRb-TA-luc (報(bào)告基因質(zhì)粒)
1μg
KL-2248-100μg
pRb-TA-luc (報(bào)告基因質(zhì)粒)
100μg
保存條件：
-20℃保存。
注意事項(xiàng)：
本質(zhì)粒未經(jīng)信裕生物書面許可不得用于任何商業(yè)用途，也不得移交給訂貨人所在實(shí)驗(yàn)室外的任何個(gè)人或單位。
本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
使用說明：
1. 首次使用1μg包裝的本產(chǎn)品時(shí)，請先取少量本質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌，進(jìn)行質(zhì)粒小量、中量或大量抽提后再用于后續(xù)用途。抽提獲得的質(zhì)粒可以通過酶切電泳進(jìn)行鑒定，或通過測序進(jìn)行鑒定。
2. 100μg包裝的本產(chǎn)品質(zhì)粒濃度為0.1μg/μl，共1ml?？梢灾苯佑糜诿盖谢蛘咿D(zhuǎn)染細(xì)胞。
3. pRb-TA-luc可以用常規(guī)的細(xì)胞轉(zhuǎn)染方法轉(zhuǎn)染細(xì)胞。檢測時(shí)可以采用信裕生物的螢火蟲螢光素酶報(bào)告基因檢測試劑盒(RG005/RG006)或雙螢光素酶報(bào)告基因檢測試劑盒(RG027/RG028)。
關(guān)鍵字： pRb-TA-luc (報(bào)告基因質(zhì)粒)說明書；pRb-TA-luc (報(bào)告基因質(zhì)粒)廠家
上海康朗生物科技有限公司是一家集研發(fā)、生產(chǎn)、銷售、服務(wù)于一體的一家生物科技企業(yè)，專營生化試劑、標(biāo)準(zhǔn)品、基因、蛋白、抗體、Elisa試劑盒、細(xì)胞生物學(xué)，分子生物學(xué)等高生物產(chǎn)品?？偛课挥谏虾?，并在北京、廣東，江西，吉林等全國30多個(gè)省市設(shè)有分公司和代理機(jī)構(gòu)。涉及的產(chǎn)品被中國科學(xué)院、清華、北大、復(fù)旦，上海交大，復(fù)旦醫(yī)學(xué)院，上海中醫(yī)藥大學(xué)，華東師范大學(xué)，第二軍醫(yī)大學(xué)，曙光醫(yī)院，浦東新區(qū)人民醫(yī)院等知名科研院所廣泛使用，可靠而穩(wěn)定的質(zhì)量和完善的售后服務(wù)確。