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DNA Shuffling試劑盒,DNA Shuffling Kit
  • DNA Shuffling試劑盒,DNA Shuffling Kit

DNA Shuffling試劑盒

價格 2990
包裝 10次
最小起訂量 10次
發(fā)貨地 上海
更新日期 2024-12-25

產(chǎn)品詳情

中文名稱:DNA Shuffling試劑盒英文名稱:DNA Shuffling Kit
保存條件: 常溫運(yùn)輸和保存純度規(guī)格: 99.9%
產(chǎn)品類別: 分子生物試劑 核酸擴(kuò)增
2024-12-25 DNA Shuffling試劑盒 DNA Shuffling Kit 10次/2990RMB 2990 常溫運(yùn)輸和保存 99.9% 分子生物試劑 核酸擴(kuò)增

DNA Shuffling試劑盒
產(chǎn)品及特點DNA Shuffling 即 DNA 分子的體外同源重組,它是一種分子水平上的定向進(jìn)化(directed evolution)技術(shù),它以一個或多個基因為起始材料,通過先隨機(jī)斷裂成小片段,再進(jìn)行互為模板和引物的 PCR(無外加引物),最后再進(jìn)行常規(guī)PCR(外加引物)等處理,最后得到含有大量 DNA 重組突變的 PCR 產(chǎn)物。其原理示意圖如下:

本產(chǎn)品就是根據(jù)上述原理優(yōu)化改進(jìn)而成,它具有下列特點:

1. 即開即用,用戶只需要提供樣品 DNA 模板,無需單獨(dú)準(zhǔn)備各成分。

2. 可以用于對長度在 1000bp 的同源片段進(jìn)行 shuffling。

3. 操作手冊經(jīng)過優(yōu)化,1-2 天即可完成,節(jié)省大量優(yōu)化時間。

4. 本產(chǎn)品足夠 10 次 DNA Shuffling 反應(yīng),只適用于科研,不能用于臨床。
規(guī)格及成分 成分 編號 十孔盒包裝
PCR MagicMix 90805 1 mL×3
DNase I 溶液(0.1U/μL) 90903a 10 μL
DNA Shuffling 試劑盒溶液 A,10× 131178a 100 μL
DNA Shuffling 試劑盒溶液 B,10× 131178b 100 μL
超純水 100935 1 mL
使用手冊 131178sc 1 份

運(yùn)輸及保存 低溫運(yùn)輸,-20℃保存,保存期限一年。

自備試劑 待突變基因片段、DNA Shuffling 引物(第二輪 PCR 引物)、膠回收試劑盒。

使用方法 

1. 提前開啟 37℃和 75℃水浴或金屬浴。

2. 待突變基因片段的制備:待突變基因片段可以用多個含同源片段的質(zhì)粒為模板、用 PCR 法或酶切法制備。制備時需保證含起始同源片段(或此同源片段的一部分)的 DNA 片段總長度要比 DNA shuffling 終產(chǎn)物(第二輪 PCR產(chǎn)物)長 200-400 bp,即第二輪 PCR 的引物位置要在此步模板制備引物內(nèi)側(cè) 100-200bp,第二輪 PCR 產(chǎn)物的長度在 1000bp 以下。每次 DNAShuffling 實驗至少需要 2 μg 起始同源片段(如果含兩個以上同源片段,則彼此的比例為 1:1:1),最多可以使用 5 μg 起始同源片段,并且必須通過膠回收的方法回收,以便徹底去除殘留的質(zhì)粒模板、引物和非特異擴(kuò)增產(chǎn)物等(如果不去除此步的引物,其將對后續(xù) PCR 造成嚴(yán)重干擾)。最后需用分光光度法準(zhǔn)確定量,此溶液即為同源片段,放冰上待用。

3. 準(zhǔn)備 DNase I 工作液,將 1 μL 本試劑盒提供的 DNase I 溶液、8uL 超純水、1 μL DNA Shuffling 試劑盒溶液 A 混合得 DNase 工作液,放冰上待用。DNase 工作液必須現(xiàn)配現(xiàn)用。

4. 設(shè)置同源片段碎片化反應(yīng):在一個 PCR 管中,按順序加入下列成分:

成分 用量

同源片段(來于兩個以上不同基因) 2-5 μg

DNA Shuffling 試劑盒溶液 A,10× 5 μL

DNA Shuffling 試劑盒溶液 B,10× 5 μL

DNase 工作液 2 μL

補(bǔ)超純水到 50 μL

5. 充分輕柔吹打混勻后 37℃水浴 8 分鐘,然后立即放 75℃水浴處理 10 分鐘以滅活 DNase I。

6. 在 2-3%瓊脂糖凝膠上電泳,用常規(guī)的膠回收法回收 25-150 bp 范圍的所有片段,分光光度法精確測定回收片段的濃度。此即為回收片段,放冰上待用。注意:一定要加合適的 DNA marker 以便確定片段范圍。

7. 回收片段重組反應(yīng):在一干凈 PCR 管中加入 0.5 μg 回收片段、50 μL PCRMix 3.0、補(bǔ)加超純水到 100 μL。反應(yīng)總體積為 100 μL

8. 按下面的 PCR 反應(yīng)參數(shù)進(jìn)行輪無引物 PCR:

過程 溫度 時間

PCR 前變性 94℃ 150 s

PCR 反應(yīng)

(40 循環(huán))

94℃ 30 s

47.5℃ 45 s

72℃ 10 s,每次循環(huán)后增加 5s

PCR 后延伸 72℃ 10 min

9. 取 5-10 μL 進(jìn)行電泳檢測(本 PCR Mix 含上樣成分,可以直接上樣。紅色示蹤劑的泳動速度相當(dāng)于 50bp DNA),然后對預(yù)期長度區(qū)域的 PCR 產(chǎn)物進(jìn)行回收(如果 Shuffling 的同源區(qū)域長度為 800bp,則回收 600-1000bp范圍的片段),得到輪 PCR 回收產(chǎn)物。

10. 留部分輪 PCR 回收產(chǎn)物之后,用超純水將其分別稀釋 10 倍、20 倍和50 倍,放冰上待用。

11. 取輪 PCR 回收產(chǎn)物原液、10 倍稀釋液、20 倍稀釋液和 50 倍稀釋液各 1uL 作為 PCR 模板,按下表設(shè)置 4 管第二輪 PCR 反應(yīng)(100μL 體系)。

成分 1-4 號管

PCR 模板(4 種) 各 1 μL(1 號加原液、2 號加 10

倍稀釋液、以此類推)

PCR MagicMix 3.0 50 μL

自備 DNA Shuffling 引物 每管各加 30 pmol

超純水 加到 100 μL

12. 按下列 PCR 參數(shù)進(jìn)行 PCR:

過程 溫度 時間

活化 94℃ 150 s

PCR 反應(yīng)

(25 次循環(huán))

94℃ 30 s

47.5℃ 45 s

72℃ 60 s,每次循環(huán)后增加 5s

PCR 后延伸 72℃ 10 min

13. 電泳檢測 4 個 PCR 產(chǎn)物,回收預(yù)期大小的 PCR 產(chǎn)物(根據(jù)引物位置估計預(yù)期大?。?,用于后續(xù)克隆和分析實驗(略)。

關(guān)鍵字: DNA Shuffling試劑盒廠家;DNA Shuffling試劑盒現(xiàn)貨

公司簡介

上??道噬锟萍加邢薰臼且患壹邪l(fā)、生產(chǎn)、銷售、服務(wù)于一體的一家生物科技企業(yè),專營生化試劑、標(biāo)準(zhǔn)品、基因、蛋白、抗體、Elisa試劑盒、細(xì)胞生物學(xué),分子生物學(xué)等高生物產(chǎn)品??偛课挥谏虾?,并在北京、廣東,江西,吉林等全國30多個省市設(shè)有分公司和代理機(jī)構(gòu)。涉及的產(chǎn)品被中國科學(xué)院、清華、北大、復(fù)旦,上海交大,復(fù)旦醫(yī)學(xué)院,上海中醫(yī)藥大學(xué),華東師范大學(xué),第二軍醫(yī)大學(xué),曙光醫(yī)院,浦東新區(qū)人民醫(yī)院等知名科研院所廣泛使用,可靠而穩(wěn)定的質(zhì)量和完善的售后服務(wù)確。
成立日期 2015-05-29 (10年) 注冊資本 100萬元整
員工人數(shù) 50-100人 年營業(yè)額 ¥ 100萬以內(nèi)
主營行業(yè) 中間體,化學(xué)試劑,醫(yī)藥原料 經(jīng)營模式 工廠
  • 上??道噬锟萍加邢薰?/span>
  • 公司成立:10年
  • 注冊資本:100萬元整
  • 企業(yè)類型:廠家
  • 主營產(chǎn)品:主營產(chǎn)品:ELISA試劑盒、重組蛋白、抗體、生化試劑、標(biāo)準(zhǔn)品、分子生物學(xué)試劑、細(xì)胞生物學(xué)等科研用品
  • 公司地址:松江區(qū)新橋鎮(zhèn)賣新公路2077號3089室
詢盤

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