本試劑盒采用可以特異性結(jié)合核酸的離心吸附柱和獨(dú)特的緩沖液系統(tǒng)，樣品裂解后，DNA在高鹽條件下與硅膠膜結(jié)合，在低鹽、高pH值時(shí)DNA從硅膠膜上洗脫下來(lái)。本試劑盒用于從小劑量的血清/血漿中提取游離DNA，所得游離DNA可直接用作PCR模板、雜交等分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。

產(chǎn)品特點(diǎn)：
·采用硅基質(zhì)膜吸附柱，簡(jiǎn)單、快速提取循環(huán)核酸。
·無(wú)需酚仿等有機(jī)試劑，安全無(wú)毒。
· Carrier RNA可以從體系中高效捕獲微量核酸。
·徹底去除污染物和PCR抑制劑，方便下游應(yīng)用。

試劑盒組成：

保存條件：室溫（15-25℃）干燥條件下，可保存12個(gè)月，更長(zhǎng)時(shí)間的保存可置于2-8℃。2-8℃保存條件下，若溶液產(chǎn)生沉淀，使用前應(yīng)將試劑盒內(nèi)的溶液在室溫放置一段時(shí)間，必要時(shí)可在37℃水浴中預(yù)熱10min，以溶解沉淀。Carrier RNA配置成儲(chǔ)液后置于-20℃。

Carrier RNA儲(chǔ)存液的配制：
在次使用Carrier RNA時(shí)，請(qǐng)將Carrier RNA（310μg）溶解在310μl RNase-Free ddH2O中，將溶液分裝儲(chǔ)存于-20℃，此時(shí)該溶液的濃度為1 μg/μl；該儲(chǔ)存液應(yīng)避免反復(fù)凍融，凍融次數(shù)不能超過(guò)3次。

注意事項(xiàng)：（請(qǐng)務(wù)必在使用本試劑盒之前閱讀此注意事項(xiàng))
1．自備試劑：無(wú)水乙醇
2．樣品使用量的確定：
  吸附柱容量：700 μl
  最小洗脫體積：20 μl
  樣本體積：量200 μl
3．若緩沖液GA或GB中有沉淀，可在37℃水浴中重新溶解。
4．所有的樣品使用前請(qǐng)平衡到室溫（15-25℃)。
5．次使用試劑盒時(shí)，請(qǐng)按照試劑瓶上的提示在緩沖液GD和漂洗液PW中添加無(wú)水乙醇。
6．為了確保從微量樣本中得到更多的DNA，試劑盒配備了Carrier RNA。由于Carrier RNA本身是小核酸，所以得到的基因組測(cè)定OD₂₆₀值會(huì)比真實(shí)值偏大，建議將得到的基因組直接用PCR進(jìn)行檢測(cè)。

使用方法：
使用前請(qǐng)先在緩沖液GD和漂洗液PW中加入無(wú)水乙醇，加入體積請(qǐng)參照瓶上的標(biāo)簽。

1．取100 μl -200 μl血清/血漿到2ml的離心管中，如不足100 μl，加緩沖液GA到100 μl終體積。
2．加入20 μl Proteinase K溶液，渦旋混勻。
3．加入200 μl的緩沖液GB （可加入1 μl Carrier RNA儲(chǔ)存液，濃度為1 μg/μl），輕輕顛倒混勻，56℃孵育10min，并不時(shí)搖動(dòng)樣品。簡(jiǎn)短離心以去除管蓋內(nèi)壁的液滴。
注意：加入緩沖液GB時(shí)可能會(huì)產(chǎn)生白色沉淀，一般56℃放置時(shí)會(huì)消失，不會(huì)影響后續(xù)實(shí)驗(yàn)。如溶液未變清亮，說(shuō)明細(xì)胞裂解不徹底，可能導(dǎo)致提取DNA量少和提取出的DNA不純。
4．加入200 μl的乙醇（96-100%）。如果室溫超過(guò)25℃，請(qǐng)將乙醇置冰上預(yù)冷。輕輕顛倒混勻樣品，室溫放置5 min，簡(jiǎn)短離心以去除管蓋內(nèi)壁的液滴。
5．將上一步所得溶液添加到一個(gè)吸附柱CR2中（吸附柱放入收集管中），12000rpm（~13400×g)離心30 sec，棄廢液，將吸附柱CR2放回收集管中。
6．向吸附柱CR2中加入500 μl緩沖液GD（使用前請(qǐng)先檢查是否已加入無(wú)水乙醇），12000rpm（~13400×g)離心30 sec，棄廢液，將吸附柱CR2放回收集管中。
7．向吸附柱CR2中加入600 μl漂洗液PW（使用前請(qǐng)先檢查是否已加入無(wú)水乙醇）12000rpm（~13400×g)離心30 sec，棄廢液，將吸附柱CR2放回收集管中。
8．重復(fù)操作步驟7。
9．12000rpm （~13400×g)離心2 min，倒掉廢液。將吸附柱CR2置于室溫放置2-5 min，以徹底晾干吸附材料中殘余的漂洗液。
  注意：這一步的目的是將吸附柱中殘余的漂洗液去除，漂洗液中乙醇的殘留會(huì)影響后續(xù)的酶反應(yīng)（酶切、PCR等）實(shí)驗(yàn)。
10．將吸附柱CR2轉(zhuǎn)入一個(gè)干凈的離心管中，向吸附膜中間位置懸空滴加20-50 μl洗脫緩沖液TB，室溫放置2-5 min，12000rpm（~13400×g)離心2 min，將溶液收集到離心管中。
  注意：洗脫緩沖液體積不應(yīng)少于20 μl，體積過(guò)小影響回收效率。為增加基因組DNA的得率，可將離心得到的溶液再次加入吸附柱CR2中，室溫放置2 min，12000rpm（~13400×g)離心2 min。洗脫液的pH值對(duì)于洗脫效率有很大影響。若用水做洗脫液應(yīng)保證其pH值在7.0-8.5范圍內(nèi)，pH值低于7.0會(huì)降低洗脫效率；且DNA產(chǎn)物應(yīng)保存在-20℃，以防DNA降解。