一些小分子可以誘導(dǎo)小鼠胚胎干細(xì)胞(ES)細(xì)胞分化為神經(jīng)元細(xì)胞。在這里,我們探討了異戊二烯基(IBA)對(duì)促進(jìn)神經(jīng)元分化的影響以及其蛋白質(zhì)異戊二烯化的潛在作用。方法和結(jié)果:采用吊滴法進(jìn)行胚胎體(EB)的形成,以模擬胚胎在體內(nèi)的發(fā)育。從EB階段(d 4)到d 8+10,用Isobavachin以終濃度為10(-7) mol/L處理EBs。香葉基香葉基轉(zhuǎn)移酶 I 抑制劑 GGTI-298 隨后用于破壞蛋白質(zhì)異戊二烯化。通過熒光顯微鏡觀察神經(jīng)元亞型,包括神經(jīng)元和星形膠質(zhì)細(xì)胞。分別使用RT-PCR和Western blot分析檢測(cè)基因和蛋白質(zhì)表達(dá)水平。在Isobavachin處理下,巢蛋白在EBs產(chǎn)生的神經(jīng)祖細(xì)胞中高表達(dá)(d 4,d 8+0)。EBs隨后進(jìn)一步分化為神經(jīng)元(以β-微管蛋白III為標(biāo)志)和星形膠質(zhì)細(xì)胞(以GFAP為標(biāo)志),它們?cè)赿 8+5和d 8+10上均以時(shí)間依賴性方式上調(diào)。與 GGTI-298 聯(lián)合處理選擇性地消除了 Isobavachin 誘導(dǎo)的神經(jīng)元分化。此外,在MAPK通路中,p38和JNK磷酸化下調(diào),而在Isobavachin處理后,ERK磷酸化在不同的神經(jīng)元分化通道上調(diào)。結(jié)論:Isobavachin可促進(jìn)小鼠ES細(xì)胞分化為神經(jīng)元細(xì)胞。該機(jī)制涉及蛋白質(zhì)異戊二烯化,隨后涉及 phos-ERK 激活和 phos-p38 脫落途徑。
與相應(yīng)的非異戊二烯化黃酮類化合物(芹菜素、甘草素)和牡荊素(芹菜素-C8-葡萄糖苷)相比,研究了異戊二烯化黃酮類化合物licoflavone C(8-異戊二烯基甘草素)和Isobavachin(8-異戊二烯基甘草素)的抗氧化和細(xì)胞毒性作用,使用代謝活性差的H4IIE肝癌和代謝活性差的C6神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞。方法和結(jié)果:在2,2-二苯基-1-三硝基肼(DPPH)測(cè)定中,所有物質(zhì)均未表現(xiàn)出自由基清除活性,也不能有效防止H2O2誘導(dǎo)的細(xì)胞內(nèi)2',7'-二氯二氫熒光素(H2DCF)氧化(氧化應(yīng)激熒光探針)。當(dāng)研究這些物質(zhì)的內(nèi)在效應(yīng)時(shí),利科韋酮C和Isobavachin在H4IIE(IC50值為42+/-5和96+/-19 μmol/L)和C6細(xì)胞(IC50值為37+/-6和69+/-3 μmol/L)中均表現(xiàn)出明顯的毒性,而非異戊二烯化類似物以及糖基化衍生物牡荊素幾乎沒有細(xì)胞毒性作用,最高可達(dá)250 μmol/L。在 H4IIE 細(xì)胞中,利科韋酮 C 和 icobavachin 誘導(dǎo)凋亡細(xì)胞死亡被檢測(cè)為半胱天冬酶 3/7 的激活(分別為 6 倍和 3.3 倍)。結(jié)論:基于這些實(shí)驗(yàn),我們建議黃酮類化合物的C8-異戊二烯化增強(qiáng)了誘導(dǎo)H4IIE細(xì)胞凋亡細(xì)胞死亡的細(xì)胞毒性,而不影響抗氧化性能。
方法和結(jié)果:合成了四種異戊二烯基黃酮,即巴伐欽1、異戊二烯基黃酮2、7,4'-二羥基-8-異戊烯基黃酮3和8-異戊二烯黃素4,通過雌激素篩選試驗(yàn)評(píng)估,在MCF-7/BOS細(xì)胞中具有雌激素樣活性。所有化合物均以劑量依賴性方式顯著刺激MCF-7/BOS細(xì)胞的增殖。Isobavachin 2 的活性最強(qiáng),而 bavachin 1 的活性最弱。結(jié)論:這些化合物的雌激素效力排名如下:2 > 4 > 3 > 1.
骨質(zhì)疏松癥是一種骨骼疾病,會(huì)導(dǎo)致骨折風(fēng)險(xiǎn)增加。中國(guó)補(bǔ)骨脂果實(shí)(Scurfpea fruit)通常用于治療骨折和關(guān)節(jié)疾病已有數(shù)千年的歷史。本研究旨在篩選可能具有刺激成骨細(xì)胞增殖和從壞血病果實(shí)中分化的活性成分。方法和結(jié)果:建立高效液相色譜法(HPLC)分析桫欏果主要成分。通過比較其保留時(shí)間與相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì),共鑒定出11種化合物。采用MTT和ALP方法測(cè)定成骨細(xì)胞增殖和分化活性。淫羊藿苷(一種異戊二烯化的黃酮類糖苷)作為陽(yáng)性對(duì)照。Bavachin和Isobavachin顯著刺激細(xì)胞增殖,而補(bǔ)骨脂酚對(duì)促進(jìn)成骨細(xì)胞分化具有更強(qiáng)的作用。所有這些化合物都被發(fā)現(xiàn)具有一個(gè)特征化的結(jié)構(gòu),即在它們的每個(gè)分子骨架中,都連接著一個(gè)異戊二烯化的側(cè)鏈。結(jié)論:這些結(jié)果導(dǎo)致了一個(gè)假設(shè),即異戊二烯基團(tuán)可能對(duì)展示活性至關(guān)重要。這些化合物與小鼠原代顱骨成骨細(xì)胞中異戊二烯基的構(gòu)效關(guān)系有待進(jìn)一步探究。
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王玲