貨號：HH0202-01；HH0202-02；HH0202-03；HH0202-04

　　技術(shù)指標(biāo)

　　外觀：白色無定型凍干粉末；蛋白純度：≥90%；比活性：≥4U/mg酶粉；過氧化氫酶：≤0.03%；肌酐酶：≤0.01%；肌氨酸氧化酶：≤0.01%NADH氧化酶：≤0.01%。

　　酶學(xué)性質(zhì)

　　來源：微生物；分類：EC3.5.3.3；分子量：48kDa(SDS-PAGE)；等電點：4.6；Km值：1.7×10-2M(Creatine)；抑制劑：Ag+，Cu2+，Hg2+；最適：pH7.5；最適溫度：45-50℃；pH穩(wěn)定性：4.5-10.0(25℃,16h)；熱穩(wěn)定性：50℃以下穩(wěn)定(pH7.5,30min)；穩(wěn)定性：-20℃靜置保存12個月保持90%以上活性；保護(hù)劑：EDTA及糖類物質(zhì)。

　　用途：水解肌酸，用于酶法肌酐試劑的研發(fā)和大量配制。

　　尿素（Urea）和DAB（ρ-dimethylaminobenzaldenhyde）反應(yīng)形成的黃色染料的量可通過分光光度計在435nm檢測。

　　酶活定義：單位酶活定義為在下述條件下，每分鐘催化反應(yīng)生成1μmol肌酸完全轉(zhuǎn)化為肌氨酸所需的酶量。

　　試劑準(zhǔn)備

　　試劑I：0.1M肌酸溶液。

　　試劑II：將2.0gDAB溶解在100mL二甲亞砜中，并加入15mL濃鹽酸。

　　酶稀釋液：50mMPBS，pH7.5,樣品用酶稀釋液將酶稀釋至2.0-3.0U/mL。

　　操作步驟

　　1.取1mL試劑I于5mLEP管中，37℃預(yù)熱5min。

　　2.加入0.1mL酶液，混勻。

　　3.37℃水浴反應(yīng)10min后，加入2.0mL試劑II終止反應(yīng)，并在25℃放置20min。

　　4.使用紫外分光光度計，測定反應(yīng)液在435nm處吸光度值。

　　5.酶稀釋液代替酶液作為空白對照。