貨號(hào)：HH0106-01，HH0106-02，HH0106-03，HH0106-04；

　　技術(shù)指標(biāo)

　　外觀：白色或微黃色無定型凍干粉末；蛋白純度：≥90%；比活性：≥150U/mg酶粉；過氧化氫酶：≤0.1%；蛋白酶：≤0.001%；肌酸酶：≤0.001%；ATP酶：≤0.001%。

　　酶學(xué)性質(zhì)

　　來源：微生物；分類：EC3.5.2.10；分子量：29kDa(SDS-PAGE)；等電點(diǎn)：5.3；Km值：5.0×10-2M(Creatinine)，8.0×10-2M(Creatine)；抑制劑：Hg2+，Cu2+，F(xiàn)e3+；最適pH：7.0-8.0；最適溫度：65℃；pH穩(wěn)定性pH：5.5-10.0(25℃,16h)；熱穩(wěn)定性：65℃以下穩(wěn)定(pH8.0,30min)；穩(wěn)定性：-20℃靜置保存12個(gè)月保持90%以上活性；保護(hù)劑：糖類以及BSA。

　　用途：水解肌酐，用于酶法肌酐試劑的研發(fā)和大量配制。

　　活性測(cè)定方法

　　原理：Creatinine+H2O-Creatinineamidohydrolase-Creatine

　　酶活定義：?jiǎn)挝幻富疃x為在下述條件下，每分鐘催化反應(yīng)生成1μmol肌酸所需的酶量。

　　試劑準(zhǔn)備

　　試劑I：0.3M磷酸鉀緩沖液，pH6.5。

　　試劑II：0.1M肌酐溶液（1.13g肌酐溶于100mLUP水中）。

　　試劑III：4%Na2CO3溶液（4.0gNa2CO3溶于100mLUP水中）。

　　試劑IV：2%α-萘酚溶液（2.0gα-萘酚溶于100mL99.5%乙醇中）。

　　試劑V：1.2gNaOH和3.2gNa2CO3溶于雙蒸水中，定容至100mL。

　　試劑VI：0.05%二乙酰溶液（0.05mL二乙酰加水定容至100mL）。

　　酶稀釋液：5mMTris-HClpH8.0

　　操作步驟

　　1.在5mL離心管中加入0.1mL試劑I，0.8mL試劑II。

　　2.37℃水浴5min。

　　3.加入0.1mL待測(cè)樣品，37℃孵育10min。

　　4.加入2.0mL試劑III終止反應(yīng)，取出置于冰上。

　　5.在新的5mL離心管中按順序加入如下試劑：第4步的溶液：80μL；雙蒸水：720μL；試劑IV：400μL；試劑V：400μL；試劑VI：400μL。

　　6.25℃靜置1h后，加入2mL雙蒸水稀釋。

　　7.用分光光度計(jì)在525nm檢測(cè)吸光度。

　　*用酶稀釋液替代酶液，其它步驟相同，所得溶液吸光度為空白吸光度（ΔAb）ΔA=ΔAs-ΔAb