背景[1-7]
PureLink RNA小量試劑盒提供了一種簡(jiǎn)單、可靠且快速的柱式方法，適用于各種來(lái)源的高質(zhì)量總RNA提取，且無(wú)需使用諸如酚等危險(xiǎn)試劑。從動(dòng)物和植物細(xì)胞、組織及血液、細(xì)菌、酵母和液體樣本中獲取高產(chǎn)量、高度完整的RNA。PureLink RNA小量試劑盒包括了足夠完成50次RNA純化的RNA裂解液、離心柱、洗脫管、回收管、洗脫緩沖液和無(wú)RNA酶的水。
PureLink RNA小量試劑盒可從多種細(xì)胞和組織類型中快速進(jìn)行總RNA純化，一次提取可獲得至多1000µg的純化RNA。從少量到中量的起始材料可獲得高質(zhì)量的總RNA，且無(wú)基因組DNA污染。
PureLink RNA小量試劑盒結(jié)合了異硫氰酸胍裂解的無(wú)毒性以及硅膠膜純化技術(shù)的快速、純度高、易于使用的優(yōu)點(diǎn)。這種安全、簡(jiǎn)便的流程可在不到20分鐘的時(shí)間內(nèi)完成，且無(wú)需使用危險(xiǎn)的酚/氯仿抽提、CsCl離心、LiCl或乙醇沉淀。PureLink RNA小量試劑盒可高效分離高質(zhì)量的總RNA，同時(shí)去除大部分基因組DNA。通常，需要來(lái)自動(dòng)物組織或哺乳動(dòng)物細(xì)胞系的RNA的大多數(shù)應(yīng)用不需要額外的DNA酶處理。然而，一些應(yīng)用，例如通過(guò)qRT-PCR進(jìn)行基因表達(dá)分析而沒有內(nèi)含子跨越引物或使用來(lái)自具有非常小或沒有內(nèi)含子的生物體的樣品可能需要更完全去除殘留的污染DNA。
應(yīng)用[8][9]
PureLink RNA小量試劑盒可用于人同源盒基因NKX3.1表達(dá)調(diào)控的研究：
前列腺癌是男性腫瘤疾病中發(fā)病率最高的惡性腫瘤之一,在發(fā)達(dá)國(guó)家中其死亡率高居第二位,在我國(guó)其發(fā)病率也有逐年增高的趨勢(shì)。前列腺癌的發(fā)生,發(fā)展和轉(zhuǎn)移與NKX3.1密切相關(guān)。NKX3.1是前列腺特異表達(dá)的、受雄激素調(diào)節(jié)的同源盒基因,在前列腺胚胎發(fā)育、上皮分化及腫瘤發(fā)生發(fā)展中起重要作用。在胚胎形成過(guò)程中,NKX3.1的表達(dá)可作為前列腺上皮分化的重要標(biāo)志。
NKX3.1基因敲除的老鼠顯示前列腺上皮發(fā)育不良、腺管形態(tài)異常和蛋白分泌障礙,表明NKX3.1對(duì)于前列腺的正常發(fā)育及維持前列腺上皮的正常分化是必需的。而且NKX3.1基因敲除鼠隨著年齡的增長(zhǎng),出現(xiàn)了類似于人前列腺上皮內(nèi)瘤的病理變化,表明NKX3.1缺失可能與前列腺癌的起始有關(guān)。人同源盒基因NKX3.1位于染色體8p21,包括兩個(gè)外顯子,一個(gè)內(nèi)含子,較短的5′-非翻譯區(qū)和較長(zhǎng)的3′-非翻譯區(qū)。
約80%的前列腺腫瘤中存在該區(qū)域的雜合缺失,表明NKX3.1在前列腺癌中可能作為抑癌基因發(fā)揮作用。但也有研究顯示不同的結(jié)果,有研究表明在前列腺癌標(biāo)本中存在NKX3.1過(guò)表達(dá)情況,同時(shí)比較轉(zhuǎn)移灶與原發(fā)灶的NKX3.1的表達(dá)情況,發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)移灶中NKX3.1過(guò)表達(dá)明顯高于原發(fā)灶,說(shuō)明NKX3.1過(guò)表達(dá)可能與前列腺癌的侵襲性有關(guān)。
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