背景[1-5]
GeneJET質粒大提試劑盒采用硅膠膜技術，方便旋轉柱形式。每個制劑可回收高達750μg的高拷貝質粒DNA，可用于多種分子生物學程序，如限制性內切酶消化，PCR，克隆，轉化，自動測序，體外轉錄和穩(wěn)健細胞系的轉染。
質粒大提是質粒大量提取的簡稱，有些實驗室稱之為大抽。顧名思義就是一次性大量培養(yǎng)細菌，大規(guī)模地從細菌中將擴增的質粒提取出來。一般質粒大量制備的用途是用于細胞的轉染，一來是因為可以大量獲得DNA，另外就是因為現(xiàn)在實驗室質粒大提都是使用質粒大提純化柱，如QIAGEN等等。提取出來的質粒純度高，雜質少，無內毒素，是直接轉染級別的。
質粒大提程序：
1)200mL含有50mg/mL氨芐或30mg/mL卡納的培養(yǎng)基中振搖過夜（12-14h）；
2)50mL離心管，4℃，4000rpm,10min收集2份細胞；
3)每管加5mLSTE懸浮細胞后，4℃，4000rpm,10min收集細胞，置-20℃貯存10min；
4)室溫解凍后，每管加4mL冰預冷的溶液Ⅰ，重懸細胞；
5)室溫下每管加8mL溶液Ⅱ后充分混勻，室溫靜置5-10min；
6)每管加6mL冰預冷的溶液Ⅲ，充分混勻，冰浴靜置10min；
7)4℃，11000rpm,30min收集裂解上清液（用紗布過濾）；
8)每管加0.6倍體積異丙醇，室溫靜置10min；
9)4℃，8000rpm,15min收集核酸沉淀，每管加5mL70%乙醇清洗；
10)4℃，8000rpm,5min收集沉淀，晾10-15min，直至管壁無液滴；
11)每管加2mLTE溶解核酸，4℃或冰浴靜置30min；
12)每管加2mL7.5mol/L乙酸銨溶液，冰浴靜置10min；
13)4℃，10000rpm,10min收集上清，每管加4mL異丙醇，混勻；
14)4℃，10000rpm,10min收集沉淀，4-5mL70%乙醇清洗沉淀；
15)4℃，10000rpm,5min收集沉淀，晾10-15min，直至管壁無液滴；
16)每管加1mLTE溶解核酸，4℃或冰浴靜置30min；
17)兩份溶液和到一管，加8μL10mg/mLRNase A，混勻轉入EP管（每管轉入500μL），37℃水浴靜置30-60min；
18)每管加250μL酚，250μL仿醇（24:1）抽提，4℃，12000rpm,10min，收集上清水相（aμL）；
19)每管加aμL仿醇（24:1）抽提，4℃，12000rpm,10min，收集上清水相（bμL）；
20)每管加2bμL-20℃乙醇和0.1bμL乙酸鈉溶液，-20℃靜置過夜；
21)4℃，12000rpm,10min收集沉淀，每管加200μL70%乙醇清洗；
22)4℃，12000rpm,5min收集沉淀，晾5-10min，直至管壁無液滴；
23)每管加10-15μLTE溶解沉淀，合并到一個EP管中，保存于-20℃冰箱中。
應用[6][7]
GeneJET質粒大提試劑盒可用于SARS-CoV刺突蛋白的融合蛋白在哺乳動物細胞中的高量表達純化及功能研究：
SARS-CoV刺突蛋白的融合蛋白在哺乳動物細胞中的高量表達純化及功能研究論文導致嚴重急性呼吸綜合征(SARS)世界性爆發(fā)流行的病原體是一種新型的冠狀病毒SARS冠狀病毒(SARS-CoV)。SARS是一種以呼吸系統(tǒng)癥狀為主要表現(xiàn)的全身性疾病，可引起全身多器官多組織損傷，導致患者死亡的主要病因為急性呼吸窘迫綜合征(ARDS)。
其宿主范圍廣，傳播速度快，且可通過飛沫甚至空氣傳播，危害極大?，F(xiàn)有研究證實，SARS-CoV的刺突蛋白(Spike protein，S蛋白)是病毒表面的最重要的膜蛋白，能夠與受體結合并促進病毒入胞，并且是誘發(fā)機體免疫系統(tǒng)產(chǎn)生中和抗體的主要抗原蛋白。但由于S蛋白存在大量的翻譯后修飾位點，主要是糖基化位點，致使通過原核細胞表達或酵母表達的蛋白將不能正確地折疊，影響其生物活性。只有在哺乳動物細胞系統(tǒng)中進行表達，S蛋白才能進行正確地修飾，折疊和加工處理，從而保持蛋白的活性。
但在哺乳動物細胞系統(tǒng)中表達SARS-CoV編碼的S蛋白又存在表達量低的特點，難以在實際中應用。通過實現(xiàn)S蛋白及其不同片段在哺乳動物細胞系統(tǒng)中高量表達及純化，使S蛋白及其片段的大規(guī)模生產(chǎn)成為可能，從而為SARS-CoV基因工程重組疫苗的規(guī)?；a(chǎn)和應用提供可能。建立綠色熒光蛋白(GFP)標記的以維甲酸受體為靶點的高通量藥物篩選細胞模型建立綠色熒光蛋白(GFP)標記的以維甲酸受體為靶點的高通量藥物篩選細胞模型，可用于篩選治療急性早幼粒細胞白血病(APL)、銀屑病、痤瘡以及腫瘤的新型藥物，具有很大的應用前景和市場價值。
參考文獻
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[6]Creation of a Stable Human Reporter Cell Line Suitable for FACS-Based,Transdominant Genetic Selection[J].Burt Richards,Jon Karpilow,Christine Dunn,Ludmilla Zharkikh,Andrew Maxfield,Alexander Kamb,David H.-F.Teng.Somatic Cell and Molecular Genetics.1999(4)
[7]郭峰.SARS-CoV刺突蛋白的融合蛋白在哺乳動物細胞中的高量表達純化及功能研究[D].中國協(xié)和醫(yī)科大學,2006.