背景[1-6]
SuperSignal Western Blot Enhancer含有膜處理試劑和一抗稀釋劑，與沒(méi)有它的檢測(cè)相比，它可以將信號(hào)強(qiáng)度和靈敏度提高3到10倍。當(dāng)由于豐度低或免疫反應(yīng)性差而難以檢測(cè)蛋白質(zhì)或抗原時(shí)，使用SuperSignal Western Blot Enhancer可顯著降低背景并增強(qiáng)低豐度和弱免疫反應(yīng)性抗原的檢測(cè)。Western Blot是分子生物學(xué)、生物化學(xué)和免疫遺傳學(xué)中常用的一種實(shí)驗(yàn)方法。
Western Blot基本原理是通過(guò)特異性抗體對(duì)凝膠電泳處理過(guò)的細(xì)胞或生物組織樣品進(jìn)行著色。通過(guò)分析著色的位置和著色深度獲得特定蛋白質(zhì)在所分析的細(xì)胞或組織中表達(dá)情況的信息。與Southern Blot或Northern Blot雜交方法類似，但Western Blot法采用的是聚丙烯酰胺凝膠電泳，被檢測(cè)物是蛋白質(zhì)，“探針”是抗體，“顯色”用標(biāo)記的二抗。經(jīng)過(guò)PAGE（聚丙烯酰胺凝膠電泳）分離的蛋白質(zhì)樣品，轉(zhuǎn)移到固相載體（例如硝酸纖維素薄膜）上，固相載體以非共價(jià)鍵形式吸附蛋白質(zhì)，且能保持電泳分離的多肽類型及其生物學(xué)活性不變。
以固相載體上的蛋白質(zhì)或多肽作為抗原，與對(duì)應(yīng)的抗體起免疫反應(yīng)，再與酶或同位素標(biāo)記的第二抗體起反應(yīng)，經(jīng)過(guò)底物顯色或放射自顯影以檢測(cè)電泳分離的特異性目的基因表達(dá)的蛋白成分。該技術(shù)也廣泛應(yīng)用于檢測(cè)蛋白水平的表達(dá)。
SuperSignal Western Blot Enhancer的特點(diǎn)：
1.提高靈敏度-實(shí)現(xiàn)信號(hào)強(qiáng)度和靈敏度，提高3到10倍•提高特異性-提高質(zhì)量差和低親和力抗體的信噪比
2.更好的透明度-減少背景Western印跡
3.膜兼容性-通過(guò)PVDF和硝酸纖維素膜提供有效的信號(hào)增強(qiáng)
4.底物兼容性-經(jīng)驗(yàn)證可用于顯色，化學(xué)發(fā)光和熒光檢測(cè)方法
應(yīng)用[7-9]
用超信號(hào)蛋白印跡增強(qiáng)劑可于水稻谷蛋白的質(zhì)譜和Western Blot鑒定與貯藏蛋白分析：
以水稻品種93-11(Oryza sativa L.ssp.Indica cv.93-11)和日本晴(Oryza sativa L.ssp.Japonica cv.Nipponbare)為材料,鑒定和分析粳稻和秈稻的谷蛋白亞基組成。通過(guò)2D-PAGE分離谷蛋白亞基并通過(guò)軟件比較各亞基組成,運(yùn)用LC-MS/MS和特異性亞基抗體兩種方法鑒定谷蛋白亞基。水稻的營(yíng)養(yǎng)品質(zhì)主要取決于兩個(gè)方面,蛋白質(zhì)含量和氨基酸含量。其中特別重要的是可消化的蛋白組成含量,以及必需氨基酸的含量。
分析水稻種子貯藏蛋白營(yíng)養(yǎng)組成為水稻育種選取高營(yíng)養(yǎng)組分品種提供了理論基礎(chǔ)。以35個(gè)優(yōu)質(zhì)栽培水稻品種作為材料,分析不同品種的種子貯藏蛋白營(yíng)養(yǎng)組成。通過(guò)SDS-PAGE分析種子貯藏蛋白組成,運(yùn)用凱氏定氮法和Bradford方法測(cè)定蛋白含量,并測(cè)定氨基酸含量。分析結(jié)果表明,水稻貯藏蛋白通過(guò)SDS-PAGE分成清蛋白、球蛋白、醇溶蛋白和谷蛋白4個(gè)組分,其中谷蛋白占50-80%絕對(duì)優(yōu)勢(shì)。
在營(yíng)養(yǎng)水平上,谷蛋白易消化,其賴氨酸含量是其他組分的9倍。稻米中的蛋白含量和氨基酸含量有一定的規(guī)律：谷蛋白組分和醇溶蛋白組分呈極其顯著負(fù)相關(guān),Lys含量和總蛋白含量呈極其顯著正相關(guān)(P<0.01)。運(yùn)用凱氏定氮法、Bradford法、氨基酸分析以及SDS-PAGE等方法分析稻米的營(yíng)養(yǎng)品質(zhì),總結(jié)了不同水稻品種之間營(yíng)養(yǎng)水平的相關(guān)性,為水稻育種選取高營(yíng)養(yǎng)品質(zhì)資源提供了理論依據(jù)。
選取蛋白含量存在顯著差異的5個(gè)優(yōu)質(zhì)栽培水稻品種作為親本,得到4個(gè)水稻親本子代的組合,其中包括3個(gè)秈稻組合和1個(gè)粳稻組合。通過(guò)不同品種的谷蛋白啟動(dòng)子序列比對(duì)和對(duì)應(yīng)谷蛋白2D-PAGE圖譜比較,初步分析粳稻和秈稻的谷蛋白組成和水稻組合之間谷蛋白組成差異。啟動(dòng)子分析結(jié)果表明,水稻谷蛋白不同亞基的啟動(dòng)子序列中重要轉(zhuǎn)錄元件排列有一定特異性；粳稻和秈稻的啟動(dòng)子序列具有幾個(gè)特異性核苷酸突變。水稻組合谷蛋白2D-PAGE圖譜結(jié)果表明：粳稻和秈稻各自的雜交組合的谷蛋白含量都具有疊加性。
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