背景^[1-6]

RNase抑制劑是在人的胎盤中存在一種特異性核糖核酸酶(RNase)抑制劑，其本質(zhì)是蛋白質(zhì)，分子量為51,000 Da，等電點(diǎn)pH值為4.7。RNasin能夠特異地與RNase以非共價(jià)鍵結(jié)合形成復(fù)合體從而使RNase失活。RNasin在緩沖液為0-0.5M NaCl，pH5-8的條件下具有活性，pH7.8時(shí)活性最高。RNasin能夠保護(hù)mRNA的完整，有利于提高轉(zhuǎn)錄及翻譯的效率，同時(shí)避免了使用有機(jī)化合物抑制劑可能帶來的影響。

常用的RNase抑制劑：

1、焦碳酸二乙酯（DEPC）：是一種強(qiáng)烈但不徹底的RNA酶抑制劑，他通過和RNA酶的活性基因團(tuán)組氨酸的咪唑環(huán)結(jié)合使蛋白質(zhì)變性，從而抑制酶的活性。

2、異硫氰酸胍：目前認(rèn)為是最有效的RNA酶抑制劑，它在裂解組織的同時(shí)也使RNA酶失活，它既可破壞細(xì)胞結(jié)構(gòu)使核酸從核蛋白中解離出來，又對(duì)RNA酶有強(qiáng)烈的變性作用。

3、氧釩核糖核苷復(fù)合物：由氧化釩離子和核苷形成的復(fù)合物，它和RNA酶結(jié)合形式過渡類物質(zhì)，幾乎能完全抑制RNA酶的活性。

4、RNA酶的蛋白質(zhì)抑制劑（RNasin）：從大鼠肝或人胚盤中提取得來的酸性糖蛋白.Rnasin是RNA酶的一種非競爭性抑制劑，可以和多種RNA酶結(jié)合，使其失活。

5、其他：SDS、尿素、硅藻土等對(duì)RNA酶也有一定的抑制作用。

RNases抑制劑，是一種大腸桿菌表達(dá)的重組蛋白，編碼基因來源于人類胎盤素，可以通過非競爭性方式按1:1比例和RNase A、RNase B或RNase C結(jié)合，并抑制這三種酶的活性，保護(hù)RNA不被這三種酶降解。但RNase Inhibitor不能抑制RNase I、T1、T2、H、U1、U2和CL3的酶活性。主要用于cDNA合成，體外轉(zhuǎn)錄，體外翻譯，以及mRNA-protein復(fù)合物分離純化等過程中保護(hù)RNA不被降解；還可用于特定RNase活性的鑒定等。

應(yīng)用^[7][8]

RNase抑制劑可用于RNA提取實(shí)驗(yàn)中防止RNA降解：

在腎癌BAS基因的表達(dá)及腎癌與癌旁組織RNA降解差異研究中抽提腎癌及其癌旁組織的總RNA中發(fā)現(xiàn)腎癌癌旁組織的RNA比腎癌組織的RNA更易降解。

為證實(shí)這一點(diǎn)并探討其存在的原因及其與原發(fā)性腎癌發(fā)生發(fā)展的關(guān)系，通過測量30對(duì)距斷流相同時(shí)間的腎癌組織與癌旁組織總RNA中28S與18S的比值，發(fā)現(xiàn)相同缺血時(shí)段腎癌組織的總RNA的28S/18S值明顯高于相應(yīng)的癌旁組織（p<0.05），且同一病腎中腎癌組織與癌旁組織的總RNA<WP=7>的28S/18S值隨著距斷流時(shí)間的延長而逐漸下降，相同時(shí)段的腎癌組織的總RNA的28S/18S值明顯高于相應(yīng)癌旁組織的28S/18S值（p<0.01）；癌旁組織的總RNA的28S/18S值于距腎斷流40分鐘時(shí)已接近1，但相應(yīng)的腎癌組織的總RNA的28S/18S值于距斷流90分鐘才接近1。

以總RNA的28S為內(nèi)參照，采用Northern Blot技術(shù)研究發(fā)現(xiàn)：16對(duì)腎癌組織的β肌動(dòng)蛋白的表達(dá)高于相應(yīng)的癌旁組織，進(jìn)一步證明腎癌癌旁組織的RNA比腎癌組織的RNA更易降解。

為進(jìn)一步明確腎癌癌旁組織的RNA比腎癌組織的RNA更易降解的原因，并分析其在腎癌發(fā)生發(fā)展中的作用。采用EnvisionTMTM法檢測了腎癌組織與癌旁組織RNase 1的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)癌旁組織腎小管的RNase 1的表達(dá)明顯高于腎癌組織（p<0.01），并可見于腎小管管腔內(nèi)；腎癌RNase 1表達(dá)與腎癌患者的年齡、性別、腫瘤的部位、側(cè)別、大小及分期無關(guān)(p>0.05)，但與腫瘤的病理類型有關(guān)，顆粒細(xì)胞癌的RNase 1的表達(dá)明顯高于透明細(xì)胞癌和混合性細(xì)胞癌（p<0.01），而透明細(xì)胞癌和混合性細(xì)胞癌的RNase 1的表達(dá)無顯著性差異(p>0.05)。

同時(shí)應(yīng)用Northern Blot技術(shù)研究18對(duì)原發(fā)性腎癌病人的腎癌組織與癌旁組織的RNase抑制劑(RI)的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)腎癌組織的RI的表達(dá)明顯高于相應(yīng)癌旁組織的RI。786 O、A498腎癌細(xì)胞株RI呈高表達(dá)。但RI的表達(dá)與腎癌患者的年齡、性別、腫瘤的部位、側(cè)別、大小、分期及病理類型無關(guān)（p>0.05）。

本研究結(jié)果表明：PTP BAS基因表達(dá)水平降低在原發(fā)性腎癌的發(fā)生過程中可能起了一定的作用，可能是腎癌的一個(gè)抑癌基因。腎癌癌旁組織的總RNA比相應(yīng)的腎癌組織的總RNA更易降解，其原因可能是腎癌組織的RNase表達(dá)降低及RI表達(dá)升高所致的RNase活性降低。腎癌組織的RNase活性降低可能是腎癌出現(xiàn)異常增殖的原因之一。提高腎癌中的RNase活性可能成為治療腎癌的一種有效方法。

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