背景^[1-6]

Protein A+G Agarose(Fast Flow,進口分裝)是一種優(yōu)質(zhì)的抗體純化親和樹脂。Pierce Protein A/G瓊脂糖由純化的蛋白A/G重組融合蛋白組成，其已經(jīng)共價固定在高質(zhì)量交聯(lián)的6％珠狀瓊脂糖（CL-6B）上。這種特殊種類的樹脂提供了最通用的色譜特征組合，用于從哺乳動物血清樣品中高純度純化全IgG。瓊脂糖珠具有適用于許多親和純化系統(tǒng)的物理和化學(xué)性質(zhì)。蛋白A/G是遺傳工程蛋白，其結(jié)合蛋白A和蛋白G的IgG結(jié)合結(jié)構(gòu)域。

融合蛋白在大腸桿菌中表達。蛋白A/G含有來自蛋白A的四個Fc結(jié)合結(jié)構(gòu)域和來自蛋白G的兩個Fc結(jié)合結(jié)構(gòu)域，導(dǎo)致最終質(zhì)量為50,460道爾頓（通過SDS-PAGE為40至45kDa）。蛋白A/G不像單獨的蛋白A那樣依賴于pH，但是具有蛋白A和G的添加特性。

蛋白A/G與所有人IgG亞類結(jié)合，使其成為純化未確定亞類同一性的多克隆或單克隆IgG抗體的理想選擇。此外，它與IgA，IgE，IgM和（在較小程度上）IgD結(jié)合。蛋白A/G也與所有小鼠IgG亞類良好結(jié)合，但不結(jié)合小鼠IgA，IgM或血清白蛋白。這使得蛋白A/G成為純化和檢測IgG亞類小鼠單克隆抗體的優(yōu)秀工具，不受IgA，IgM和鼠血清白蛋白的干擾。

小鼠單克隆的單個亞類可能對嵌合蛋白A/G具有比對蛋白A或蛋白G更強的親和力。Pierce Protein A/G Agarose使用Thermo Scientific AminoLink Coupling Chemistry制備，與傳統(tǒng)的配體固定方法相比，它具有多種優(yōu)勢。AminoLink固定化通過簡單的酰胺鍵導(dǎo)致瓊脂糖珠的糖單體和蛋白A上的天然賴氨酸殘基之間的綴合。與典型的溴化氰（CNBr）固定不同，AminoLink方法不會引入任何新的化學(xué)基團，這些化學(xué)基團可能導(dǎo)致不希望的非特異性結(jié)合并產(chǎn)生穩(wěn)定的，基本上不可逆的鍵。結(jié)果是高結(jié)合能力的樹脂，其通過多輪抗體純化保留功能性固定的蛋白A/G。

Pierce Protein A/G Agarose幾乎可以從血清，腹水，細胞培養(yǎng)上清液和其他抗體樣品中結(jié)合所有同種型和哺乳動物IgG，從而實現(xiàn)有效的抗體純化。因為固定的蛋白A/G結(jié)合了蛋白A和蛋白G的免疫球蛋白結(jié)合結(jié)構(gòu)域，所以該樹脂對于來自廣泛哺乳動物宿主物種的IgG抗體的親和純化是有效的。

應(yīng)用^[7][8]

主要用于免疫沉淀(Immunoprecipitation,IP)或免疫共沉淀(Co-IP)，也可以用于抗體的純化。Protein A+G Agarose也適合于免疫沉淀所有Protein A Agarose和Protein G Agarose單獨可以免疫沉淀的抗體，包括mouse IgG1,IgG2a,IgG2b,IgG3,IgA,rat IgG1,IgG2a,IgG2b,IgG2c,rabbit IgG,rabbit and goat polyclonal Abs，以及human IgG1,IgG2,IgG3和IgG4。

肝細胞核因子HNF3β是一類在肝臟中富集表達的轉(zhuǎn)錄因子,調(diào)控多種肝臟基因的組織特異性表達,參與維持肝臟正常的表型與生理功能。敲除HNF3β的小鼠不能形成正常的神經(jīng)脊索并早期胚胎致死,HNF3β的變異可能與2型糖尿病的發(fā)生相關(guān)。HNF3β參與糖代謝、脂肪代謝、調(diào)控膽酸以及生長相關(guān)基因的表達調(diào)控。HNF3β在調(diào)控基因轉(zhuǎn)錄的過程中需要募集多種輔助因子協(xié)同發(fā)揮作用。

對HNF3β相互作用蛋白質(zhì)的挖掘研究,有助于更深入的探索HNF3β在生命過程中的功能及作用機制。目前有關(guān)HNF3β蛋白質(zhì)間相互作用的報道還相對較少,已知的與HNF3β發(fā)揮相互作用的蛋白質(zhì)只有8個,包括OTX2,SRC1,TLE1,HOXA5,HNF6A,GSC,EN2,LHX1等,它們都參與轉(zhuǎn)錄調(diào)控。這些數(shù)據(jù)對于全面的闡明HNF3β蛋白復(fù)合體的組成及動態(tài)變化還是遠遠不夠的。目前大規(guī)模研究蛋白質(zhì)間相互作用的方法主要有酵母雙雜交技術(shù),但由于要去除轉(zhuǎn)錄激活區(qū),因此并不適用于研究轉(zhuǎn)錄因子。

免疫共沉淀技術(shù)可用于研究生理水平下蛋白質(zhì)間的相互作用,隨著質(zhì)譜技術(shù)的發(fā)展,其準確性高與速度快的優(yōu)點使免疫共沉淀聯(lián)合質(zhì)譜分析技術(shù)已被廣泛應(yīng)用于尋找生理水平下新的相互作用。對HNF3β相互作用蛋白質(zhì)進行了分離鑒定,并對LMNA-HNF3β相互作用介導(dǎo)的生物學(xué)功能進行了初步的研究。以HNF3β特異抗體免疫沉淀分離HepG2細胞內(nèi)HNF3β蛋白質(zhì)復(fù)合體,SDS-PAGE電泳、考馬斯亮藍染色,切取與對照組存在差異的條帶進行SDS-PAGE膠上蛋白質(zhì)LTQ質(zhì)譜鑒定其組成成分。

參考文獻

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