蛋白上樣緩沖液

蛋白上樣緩沖液的主要成分是SDS、甘油、溴酚藍(lán)、TRIS，其中甘油的作用是使樣品沉到點(diǎn)樣孔中而不漂浮起來，SDS是結(jié)合蛋白質(zhì)，使所有蛋白質(zhì)所帶電荷性質(zhì)一樣，但不同分子量的蛋白結(jié)合的SDS數(shù)量是不一樣的。溴酚藍(lán)是指示劑，可以用來觀察大概的電泳過程，因?yàn)樗诓煌瑵舛鹊哪z中泳動(dòng)的速率不一樣，從而也可以看做是一個(gè)蛋白樣品，這樣就可以直觀的大概了解蛋白泳動(dòng)到了哪個(gè)位置，但是只能看一個(gè)大概。部分緩沖液加有SDS，SDS主要是促使聚合酶變性，因?yàn)闆]有除盡的聚合酶會(huì)結(jié)合在DNA雙鏈上影響它的遷移速率。

溴酚藍(lán)（Bromophenol blue）是一種淺黃色到棕黃色粉末；易溶于氫氧化鈉溶液，溶于甲醇、乙醇和苯，微溶于水(約0.4g/100ml)，最大吸收波長(zhǎng)422nm。是一種pH指示劑，在pH 3.0~4.6范圍，顏色由黃變藍(lán)。常用做電泳指示染料，凝膠中電泳遷移速度在小分子核酸或蛋白質(zhì)區(qū)域。

SDS是一種存在于SDS-PAGE樣品緩沖液中的去污劑，在其中與少量沸騰物和還原劑（通常是DTT或B-ME一起分解蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)二硫鍵）一起，會(huì)破壞SDS-PAGE的三級(jí)結(jié)構(gòu)。

SDS還用均勻的負(fù)電荷包被蛋白質(zhì)，從而掩蓋了R-基團(tuán)上的固有電荷。 SDS與線性蛋白質(zhì)相當(dāng)均勻地結(jié)合（大約1.4g SDS / 1g蛋白質(zhì)），這意味著蛋白質(zhì)的電荷現(xiàn)在大約與其分子量成正比。

SDS也存在于凝膠中，以確保蛋白質(zhì)線性化并掩蓋電荷后，在整個(gè)運(yùn)行過程中保持這種狀態(tài)。

SDS緩沖液的配方

SDS上樣緩沖液：取0.063mlpH6.8的Tris-Hcl緩沖液與 5ml的容量瓶中，依次加入 0.1g溴酚藍(lán) BPB十二烷基環(huán)酸鈉 SDS、5.0mg和 0.5ml甘油；加入適量去離子水?dāng)嚢枞芙夂?，定容?ml；小份(1ml/份)分裝后，在-20℃℃下保存?zhèn)溆谩?/p>

SDS-PAGE 電泳緩沖液：稱取3.02g三羥甲基氨基甲烷(Tris）于1L的容量瓶中，加入18.8g甘氨酸(Glycine)和 1.0gSDS；加去離子水溶解并混合均勻后，定容至1L，室溫下保存?zhèn)溆谩?/p>

SDS-PAGE蛋白上樣緩沖液

SDS-PAGE蛋白上樣緩沖液(SDS-PAGE Sample Loading Buffer, 5X)，是一種經(jīng)過改良的以溴酚藍(lán)為染料，5倍濃縮的蛋白上樣緩沖液。可以直接用于細(xì)胞或組織樣品的裂解，并用于后續(xù)常規(guī)的SDS-PAGE蛋白樣品的上樣。使用該產(chǎn)品直接裂解蛋白樣品的優(yōu)點(diǎn)是比較便捷；缺點(diǎn)是裂解好的蛋白樣品不能用常規(guī)的蛋白定量方法測(cè)定蛋白濃度。這樣蛋白上樣量的均一性就較難控制，需要借助考馬斯亮藍(lán)等的染色結(jié)果或Western的檢測(cè)結(jié)果，來調(diào)整上樣量。當(dāng)細(xì)胞量或組織用量能控制得比較均一時(shí)，使用本裂解液直接裂解獲取蛋白樣品會(huì)比較便捷。本緩沖液已經(jīng)含有還原劑DTT，有輕微刺激性氣味。使用時(shí)按照每4微升蛋白樣品加入1微升蛋白上樣緩沖液(5X)的比例，混合蛋白樣品和蛋白上樣緩沖液(5X)。100oC或沸水浴加熱3-5分鐘，以充分變性蛋白。