通用細胞凍存液簡介[1-3]
通用細胞凍存液以進口FBS、DMSO為主要原材料配制，適用于是各種哺乳動物原代細胞，傳代細胞系和雜交瘤細胞等的凍存保種。本產(chǎn)品為即用型試劑，儲存穩(wěn)定，使用方便，細胞存活率高。
細胞凍存是細胞保存的主要方法之一。利用凍存技術(shù)將細胞置于-196℃液氮中低溫保存，可以使細胞暫時脫離生長狀態(tài)而將其細胞特性保存起來，這樣在需要的時候再復(fù)蘇細胞用于實驗。而且適度地保存一定量的細胞，可以防止因正在培養(yǎng)的細胞被污染或其他意外事件而使細胞丟種，起到了細胞保種的作用。除此之外，還可以利用細胞凍存的形式來購買、寄贈、交換和運送某些細胞。細胞凍存時向培養(yǎng)基中加入保護劑--終濃度5%．15%的甘油或二甲基亞砜(DMSO)，可使溶液冰點降低，加之在緩慢凍結(jié)條件下，細胞內(nèi)水分透出，減少了冰晶形成，從而避免細胞損傷。采用"慢凍快融"的方法能較好地保證細胞存活。標準冷凍速度開始為-1到-2℃/min，當溫度低于-25℃時可加速，到-80℃之后可直接投入液氮內(nèi)(-196℃)。
通用細胞凍存液
細胞凍存原理：
細胞凍存及復(fù)蘇的基本原則是慢凍快融，實驗證明這樣可以限度的保存細胞活力。如今細胞凍存多采用甘油或二甲基亞砜作保護劑，這兩種物質(zhì)能提高細胞膜對水的通透性，加上緩慢冷凍可使細胞內(nèi)的水分滲出細胞外，減少細胞內(nèi)冰晶的形成，從而減少由于冰晶形成造成的細胞損傷。復(fù)蘇細胞應(yīng)采用快速融化的方法，這樣可以保證細胞外結(jié)晶在很短的時間內(nèi)即融化，避免由于緩慢融化使水分滲入細胞內(nèi)形成胞內(nèi)再結(jié)晶對細胞造成損傷。
通用細胞凍存液的使用方法同其他細胞凍存液基本一致，原則上細胞每支安瓿含1-10×106/ml。
消化到位的貼壁細胞，或最后一次離心后棄掉上清液，加入細胞凍存液，重懸、吹散沉淀的細胞，分裝入細胞凍存管，密封標記后按常規(guī)操作流程依次經(jīng)4℃，-20℃，-80℃直至液氮罐或用程序降溫儀逐級降溫凍存。
通用細胞凍存液優(yōu)點如下：
1、減少基因漂移；
2、減緩細胞系的衰老；
3、穩(wěn)定表型；
4、減少微生物污染及交叉污染機會等。
細胞冷凍的原理在于盡可能降低細胞內(nèi)的晶體形成，減少細胞內(nèi)水凝固所形成的高濃度溶質(zhì)對細胞造成的低溫損傷，從提高細胞復(fù)蘇時的存活率。細胞凍存的數(shù)量應(yīng)保證復(fù)蘇時低溫保護劑獲得1:10～1:20的稀釋，稀釋后的細胞濃度扔高于正常傳代的細胞濃度為宜，這是因為當?shù)蜏乇Ｗo劑稀釋10～20倍以后，該濃度一般不會對細胞造成毒性損傷。
通用細胞凍存液操作步驟:
1、培養(yǎng)細胞至對數(shù)生長晚期,顯微鏡觀察其外觀、形態(tài)、有無污染等,取狀態(tài)良好的細胞進行凍存操作。如為貼壁生長細胞,用胰蛋白酶消化并用完全培養(yǎng)基終止消化,進行細胞計數(shù);如為懸浮生長細胞,進行細胞計數(shù)。
2、500~1000g離心5min,棄上清。
3、加入適量的通用細胞凍存液,重懸細胞,使細胞濃度達到1~10×106/ml,置于凍存管中,密閉、不要擰的太緊,避免彎曲變形。
4、一般遵循1℃/min的速率進行冷凍。亦可采用4℃20min,-20℃30min,-70℃過夜,置于液氮罐中長期存儲。
細胞凍存管融化
1.將細胞凍存管取出，浸入37℃水浴鍋內(nèi)，輕輕晃動，注意融化，當融得只剩一個小冰塊時，將細胞插入冰中。
2.加入4℃預(yù)冷的培養(yǎng)基，用手指輕彈懸浮細胞團。
3.250g離心10min，去除上清液，再加入培養(yǎng)基，輕輕懸浮。
4. 盡量將細胞中的DMSO洗去，計數(shù)。
參考文獻
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