背景[1-3]
REC IL-7(MURINE)是一種通過基因重組技術(shù)生產(chǎn)的、與小鼠自然產(chǎn)生的IL-7具有相同氨基酸序列的蛋白質(zhì)。IL-7是一種重要的細(xì)胞因子，對于淋巴細(xì)胞的生成、增殖、分化和存活都起著至關(guān)重要的作用。IL-7(Mouse)在免疫系統(tǒng)中起著重要的作用，特別是在T細(xì)胞的發(fā)育和成熟過程中。它可以促進(jìn)T細(xì)胞的增殖和分化，并參與調(diào)節(jié)T細(xì)胞的功能。此外，IL-7(Mouse)還可以促進(jìn)B細(xì)胞的增殖和分化，并參與調(diào)節(jié)B細(xì)胞的功能。
IL-7(Mouse)在腫瘤免疫治療中也有一定的應(yīng)用前景。研究表明，IL-7(Mouse)可以增強(qiáng)腫瘤特異性T細(xì)胞的活性，并促進(jìn)其對腫瘤細(xì)胞的攻擊。因此，IL-7(Mouse)可能成為一種有效的腫瘤免疫治療靶點(diǎn)。
REC IL-7(MURINE)
小鼠重組IL-7的制備通常涉及以下幾個(gè)步驟：
1.基因克?。簭男∈蠹?xì)胞中提取IL-7的基因序列，并將其克隆到適當(dāng)?shù)谋磉_(dá)載體中。
2.表達(dá)與純化：將包含IL-7基因的表達(dá)載體導(dǎo)入到宿主細(xì)胞（如大腸桿菌、酵母或哺乳動(dòng)物細(xì)胞）中，通過培養(yǎng)這些細(xì)胞使IL-7基因表達(dá)并產(chǎn)生重組蛋白。隨后，通過一系列的純化步驟，從細(xì)胞培養(yǎng)液中分離并純化出重組IL-7。
3.活性測定：對純化后的重組IL-7進(jìn)行生物活性測定，以確保其能夠正常發(fā)揮功能。
小鼠重組IL-7在生物醫(yī)學(xué)研究中具有廣泛的應(yīng)用，例如：
研究免疫系統(tǒng)：用于研究IL-7在淋巴細(xì)胞發(fā)育、增殖和存活中的作用，以及與其他細(xì)胞因子的相互作用。
治療免疫缺陷：在某些情況下，小鼠重組IL-7可用于治療由免疫缺陷引起的疾病，如嚴(yán)重聯(lián)合免疫缺陷（SCID）等。
疫苗研發(fā)：在疫苗研發(fā)過程中，小鼠重組IL-7可用于增強(qiáng)疫苗的免疫效果，提高疫苗的保護(hù)力。
應(yīng)用[4][5]
REC IL-7(MURINE)可以用于IL-7促進(jìn)老齡小鼠T細(xì)胞免疫記憶及胸腺T細(xì)胞發(fā)育的機(jī)制研究
通過改善老年人的中央型記憶T細(xì)胞(Central memory T cell,TCM),進(jìn)而提高老年人對亞單位疫苗的免疫效果。白細(xì)胞介素7(Interleukin 7,IL-7)具有促進(jìn)胸腺細(xì)胞、初始T細(xì)胞和記憶T細(xì)胞增殖和維持記憶T細(xì)胞存活的作用,推測其可以促進(jìn)結(jié)核亞單位疫苗在老年人體內(nèi)產(chǎn)生長期免疫應(yīng)答。因此,本研究利用老齡小鼠模型,探討IL-7輔助結(jié)核亞單位疫苗促進(jìn)老齡個(gè)體產(chǎn)生長期免疫記憶并探索其機(jī)制。細(xì)胞因子和轉(zhuǎn)錄因子在中央型記憶T細(xì)胞(Central memory T cell,TCM)的產(chǎn)生和維持中發(fā)揮重要作用。其中,轉(zhuǎn)錄因子Id3、Bcl6和Bach2促進(jìn)記憶T細(xì)胞形成,Blimp1促進(jìn)效應(yīng)T細(xì)胞終末分化。為了進(jìn)一步研究IL-7對免疫記憶的調(diào)控機(jī)制,我們利用6-8周齡小鼠模型,探討REC IL-7(MURINE)對免疫記憶分化相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子的調(diào)控機(jī)制。年齡增長導(dǎo)致的胸腺逐漸萎縮最終導(dǎo)致胸腺輸出的初始T細(xì)胞減少,外周初始T細(xì)胞的減少使得接種疫苗后活化的T細(xì)胞減少,疫苗的效力下降。年齡增長也會(huì)引起DNA甲基化的顯著變化,其中,DNA甲基化水平通常隨著年齡的增長而顯著上升,啟動(dòng)子區(qū)發(fā)生DNA甲基化修飾會(huì)促使基因的轉(zhuǎn)錄抑制或表達(dá)。為了進(jìn)一步研究IL-7對老齡小鼠中樞免疫系統(tǒng)中胸腺細(xì)胞發(fā)育的影響,我們采用老齡小鼠模型,探討IL-7對胸腺細(xì)胞不同發(fā)育階段的影響,并從表觀遺傳修飾角度探索其機(jī)制。
IL-7促進(jìn)老齡小鼠結(jié)核亞單位疫苗免疫產(chǎn)生長期免疫記憶目的:研究IL-7輔助結(jié)核亞單位疫苗促進(jìn)老齡小鼠產(chǎn)生T細(xì)胞免疫記憶及其機(jī)制。
方法:(1)制備結(jié)核亞單位疫苗(MH+LT29)/DP。(2)應(yīng)用腺相關(guān)病毒包裝系統(tǒng)構(gòu)建和包裝r AAV-IL-7。(3)免疫方案。(1)6-8周齡小鼠和老齡小鼠(40-42周齡)接種(MH+LT29)/DP。(2)老齡小鼠接種(MH+LT29)/DP+r AAV-IL-7。接種時(shí)間為0、2和4周。實(shí)驗(yàn)小鼠均為C57BL/6品系小鼠。(4)免疫檢測:末次免疫后25周進(jìn)行免疫檢測。此時(shí),主要反映TCM介導(dǎo)的免疫應(yīng)答。檢測內(nèi)容如下:(1)ELISA檢測抗原刺激脾臟淋巴細(xì)胞后分泌IL-2、TNF-α和IFN-γ的水平。(2)兩次抗原重復(fù)刺激后,流式細(xì)胞術(shù)檢測CD4+和CD8+T細(xì)胞產(chǎn)生IFN-γ能力,反映最初形成TCM的功能。(3)特異性抗原刺激后,Ed U標(biāo)記法檢測CD4+記憶T細(xì)胞的增殖能力。(4)ELISA檢測血清中抗原特異性抗體REC IL-7(MURINE)Ig G的水平。以上指標(biāo)檢測主要評價(jià)REC IL-7(MURINE)對老齡小鼠免疫記憶的促進(jìn)作用。
參考文獻(xiàn)
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