背景^[1-3]

MADB-106，也被稱為MADB106或大鼠乳腺癌細(xì)胞，是一種來源于F344大鼠的乳腺癌細(xì)胞系。這些細(xì)胞具有上皮細(xì)胞樣的形態(tài)，并且呈現(xiàn)出貼壁生長(zhǎng)的特性。在培養(yǎng)條件下，MADB-106細(xì)胞需要使用特定的培養(yǎng)基，通常是DMEM基礎(chǔ)培養(yǎng)基加上10%的胎牛血清（FBS）和1%的雙抗（P/S）。

MADB-106細(xì)胞被廣泛用于科學(xué)研究中，特別是在生物學(xué)、醫(yī)學(xué)和藥學(xué)等領(lǐng)域。由于其具有乳腺癌的特性，這些細(xì)胞可以用于研究乳腺癌的發(fā)病機(jī)制、藥物篩選和療效評(píng)估等。此外，MADB-106細(xì)胞也可以作為模型細(xì)胞系，用于研究細(xì)胞生長(zhǎng)、分化、凋亡和信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)等生物學(xué)過程。

在培養(yǎng)MADB-106細(xì)胞時(shí)，需要注意細(xì)胞傳代比例、換液頻率和培養(yǎng)條件等因素，以保證細(xì)胞的生長(zhǎng)狀態(tài)和實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。同時(shí)，由于這些細(xì)胞是來源于大鼠的，因此在實(shí)驗(yàn)過程中需要遵守相關(guān)的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)倫理和法規(guī)。

MADB-106

MADB-106細(xì)胞培養(yǎng)操作

1)復(fù)蘇MADB-106細(xì)胞：以下細(xì)胞培養(yǎng)凍存處理僅供參考，具體操作步驟以隨貨產(chǎn)品說明書為主。

將含有1 mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加4 mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000 rpm條件下離心3 min，棄去上清液，加1-2 mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10 cm皿中，加入約8 mL培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2)MADB-106細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

a、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。

b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，使消化液浸潤(rùn)所有細(xì)胞，棄去消化液，將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中消化1 min，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。

c、按6-8 mL/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后裝入無菌離心管中，1000 rpm離心4 min，棄去上清液，補(bǔ)加1-2 mL培養(yǎng)液后吹勻。

d、將細(xì)胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

3)MADB-106細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面T25瓶為例；

a、收集細(xì)胞及細(xì)胞培養(yǎng)液，裝入無菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。

b、根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入無血清細(xì)胞凍存液，使細(xì)胞密度5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細(xì)胞懸液，注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。

c、將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

應(yīng)用^[4-5]

MADB-106細(xì)胞可以用于丙泊酚對(duì)荷瘤大鼠MADB106腫瘤細(xì)胞肺轉(zhuǎn)移及E-cadherin和β-catenin的影響

丙泊酚可抑制MADB-106細(xì)胞的肺轉(zhuǎn)移,并下調(diào)轉(zhuǎn)移瘤中MTA1和Wntl的表達(dá),表明丙泊酚可能通過Wnt通路抑制腫瘤的轉(zhuǎn)移及增殖。為進(jìn)一步探討丙泊酚對(duì)腫瘤轉(zhuǎn)移的作用及機(jī)制,本研究通過MADB-106細(xì)胞肺轉(zhuǎn)移大鼠模型,觀察不同劑量丙泊酚對(duì)腫瘤肺轉(zhuǎn)移及轉(zhuǎn)移瘤組織E-cadherin和β-catenin表達(dá)的影響。

材料和方法1.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物、藥品和試劑清潔級(jí)Fischer344雄性大鼠,12～14周齡,體重200～220g。鼠抗人E-cadherin單克隆抗體(即用型),鼠抗人β-catenin單克隆抗體(即用型)；丙泊酚。

2. 腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)MADB-106細(xì)胞,MADB-106細(xì)胞是大鼠乳腺腺癌細(xì)胞系的一種選擇性變異,經(jīng)靜脈注入Fischer344大鼠循環(huán)系統(tǒng)后,只高選擇性地種植轉(zhuǎn)移在大鼠肺部。MADB-106細(xì)胞在RPMI1640培養(yǎng)液(1640基礎(chǔ)培養(yǎng)基90%,FBS10%,雙抗0.1%)中培養(yǎng),放于37℃,100%濕度和5%C02的培養(yǎng)箱中培養(yǎng),并通過使用0.25%胰蛋白酶消化后傳代培養(yǎng)。

3.動(dòng)物分組和處理40只大鼠隨機(jī)分為4組：生理鹽水組(S組)；脂肪乳劑組(F組)；丙泊酚30mg/kg組(P1組)；丙泊酚50mg/kg組(P2組),每組10只。1%戊巴比妥鈉50mg/kg腹腔注射后行股靜脈置管,經(jīng)大鼠股靜脈持續(xù)泵入等容量生理鹽水,脂肪乳劑和丙泊酚,維持鼠肛溫在36-37℃,呼吸頻率約為60次/分,心率320-340次/分左右；給藥1小時(shí)后經(jīng)大鼠股靜脈注入0.5mL MADB-106細(xì)胞(2×105/ml),拔除股靜脈置管,縫合切口,在SPF級(jí)環(huán)境中飼養(yǎng)三周。

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