背景^[1-3]

SP20(小鼠骨髓瘤細(xì)胞)是一種小鼠骨髓瘤細(xì)胞系，它是由一名患有漿細(xì)胞瘤的小鼠中分離出來(lái)的。這種細(xì)胞系在腫瘤學(xué)研究中具有重要價(jià)值，因?yàn)樗梢杂糜谠u(píng)估新的治療方法和藥物的有效性，以及研究漿細(xì)胞瘤的發(fā)生和發(fā)展機(jī)制。

SP20細(xì)胞系通常被用于體外實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?，例如?xì)胞培養(yǎng)、基因轉(zhuǎn)染、蛋白質(zhì)表達(dá)等技術(shù)。研究人員可以通過(guò)改變培養(yǎng)條件、添加生長(zhǎng)因子或使用基因編輯技術(shù)來(lái)改變SP20細(xì)胞系的行為，以更好地模擬體內(nèi)環(huán)境并提高治療效果。此外，SP20細(xì)胞系還可以用于研究腫瘤微環(huán)境對(duì)腫瘤生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移的影響。

SP20(小鼠骨髓瘤細(xì)胞)

SP20(小鼠骨髓瘤細(xì)胞)培養(yǎng)操作

1)復(fù)蘇SP20(小鼠骨髓瘤細(xì)胞)：以下細(xì)胞培養(yǎng)凍存處理僅供參考，具體操作步驟以隨貨產(chǎn)品說(shuō)明書為主。

將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過(guò)夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2)SP20(小鼠骨髓瘤細(xì)胞)傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

a、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。

b、加1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。

c、按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。

d、將細(xì)胞懸液按1：2比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

3)SP20(小鼠骨髓瘤細(xì)胞)凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面T25瓶為例；

a、收集細(xì)胞及細(xì)胞培養(yǎng)液，裝入無(wú)菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。

b、根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入無(wú)血清細(xì)胞凍存液，使細(xì)胞密度5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細(xì)胞懸液，注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。

c、將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

應(yīng)用^[4-5]

SP20(小鼠骨髓瘤細(xì)胞)可以用于大鼠有核紅細(xì)胞（中幼、晚幼成紅細(xì)胞）與小鼠漿細(xì)胞瘤（SP2/0）細(xì)胞雜交調(diào)控惡性表型及基因表達(dá)的研究

本研究選用正常大鼠中幼、晚幼成紅細(xì)胞與SP20(小鼠骨髓瘤細(xì)胞)細(xì)胞進(jìn)行異種細(xì)胞雜交，研究哺乳動(dòng)物紅細(xì)胞胞質(zhì)因子對(duì)腫瘤細(xì)胞惡性調(diào)控的效應(yīng)及其機(jī)制。

一、通過(guò)哺乳動(dòng)物成體骨髓及造血期胚肝的紅系細(xì)胞終末分化過(guò)程的形態(tài)學(xué)觀察，驗(yàn)證了正常情況下哺乳動(dòng)物體內(nèi)紅系細(xì)胞發(fā)育到晚幼成紅細(xì)胞階段出現(xiàn)排核現(xiàn)象。用改良的Iscove甲基纖維素方法對(duì)動(dòng)物骨髓紅系祖細(xì)胞進(jìn)行體外培養(yǎng)，對(duì)形成的紅系集落細(xì)胞分化進(jìn)行的形態(tài)學(xué)觀察發(fā)現(xiàn)：(1)在低濃度紅細(xì)胞生成素(Erythropoletin，簡(jiǎn)稱EPO，下同)培養(yǎng)條件下，處于較晚發(fā)育期的紅系祖細(xì)胞CFU-E可形成數(shù)十個(gè)細(xì)胞組成的集落；但集落之間，其細(xì)胞數(shù)量及發(fā)育的同步性有較大差異；

(2)在高濃度EPO培養(yǎng)條件下，處于較早發(fā)育期的紅系祖細(xì)胞BFU-E可形成數(shù)千個(gè)甚至上萬(wàn)個(gè)細(xì)胞組成的大集落，而且生長(zhǎng)同步性較高；(3)在CFU-E及BFU-E的培養(yǎng)集落中均可觀察到自然出現(xiàn)的核固縮及排核現(xiàn)象。上述體內(nèi)、體外晚幼成紅細(xì)胞排核現(xiàn)象，為紅細(xì)胞自然排核學(xué)說(shuō)以及薛杜普等提出的紅系終末細(xì)胞中存在不利于細(xì)胞核增殖生長(zhǎng)的“胞質(zhì)因子”工作假說(shuō)提出了有利的佐證。

二、利用Harrison分離骨髓血細(xì)胞方法，用40％至70％不連續(xù)Percoll介質(zhì)梯度，從15天Wistar大鼠胚肝中分離中幼、晚幼成紅細(xì)胞。從70％Percoll梯度介面，比重為1.095g／ml可收集到純度高達(dá)96％的中幼、晚幼成紅細(xì)胞。經(jīng)(Giemsa-Wright血細(xì)胞染色，聯(lián)苯胺染色以及透射電鏡檢查鑒定，除極少量早幼成紅細(xì)胞和網(wǎng)織紅細(xì)胞外，幾乎沒(méi)有其他類型細(xì)胞雜混。臺(tái)盼蘭活體染色檢查表明：分離后的中幼、晚幼成紅細(xì)胞保持95％以上的活性率。本方法操作簡(jiǎn)便，需時(shí)間少，分離后的細(xì)胞純度及活性率都較高，可直接用作細(xì)胞生物學(xué)、生化等研究。

三、利用細(xì)胞雜交的細(xì)胞工程手段，首次系統(tǒng)地研究了大鼠中幼、晚幼成紅細(xì)胞與SP20(小鼠骨髓瘤細(xì)胞)融合后惡性表型的表達(dá)狀態(tài)，分析自然去核前紅細(xì)胞胞質(zhì)對(duì)骨髓瘤細(xì)胞惡性增殖的調(diào)控作用，以及晚幼期固縮核重新被激活的可能性。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：雜交細(xì)胞出現(xiàn)瘤細(xì)胞與網(wǎng)織紅細(xì)胞雜交同樣的表型逆轉(zhuǎn)及去惡性化特征，主要表現(xiàn)在細(xì)胞體積增大、核質(zhì)比例減?。籇NA合同速率降低、分裂指數(shù)下降，細(xì)胞生長(zhǎng)顯著減慢；在軟瓊脂中不形成集落，在裸鼠體內(nèi)失去了長(zhǎng)瘤能力。超微結(jié)構(gòu)分析表明，雜交細(xì)胞表面膜微絨毛、指狀突及皺褶突等均明顯減少，核內(nèi)異染色質(zhì)比例增高，核仁數(shù)目減少或消失，細(xì)胞質(zhì)中常可見(jiàn)有空泡或黑色致密顆粒出現(xiàn)；少數(shù)雜交細(xì)胞出現(xiàn)線粒體腫脹、核固縮甚至排核現(xiàn)象。

參考文獻(xiàn)

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