背景^[1-3]

RF6A猴脈絡(luò)膜-視網(wǎng)膜(內(nèi)皮)細胞系取自64日孕期胎猴脈絡(luò)膜-視網(wǎng)膜，細胞表達因子VIII、纖維連接蛋白基因。RF/6A細胞在早期自發(fā)轉(zhuǎn)化并已傳代540次以上，電鏡下觀察到Weibel-Palade顆粒。高代次的RF/6A細胞用作滋養(yǎng)層以增強貼壁、轉(zhuǎn)接能力和供養(yǎng)眼色素層黑素細胞。EXPASY細胞庫顯示，細胞屬性可能被誤認，雖然最初被認為是一種內(nèi)皮細胞系，但已證明缺乏這種細胞類型的功能和轉(zhuǎn)錄組學特征。

RF6A猴脈絡(luò)膜-視網(wǎng)膜(內(nèi)皮)細胞系

RF6A猴脈絡(luò)膜-視網(wǎng)膜(內(nèi)皮)細胞系細胞處理：

凍存RF6A猴脈絡(luò)膜-視網(wǎng)膜(內(nèi)皮)細胞系細胞的復蘇：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL完全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，完全培養(yǎng)基重懸細胞。然后將細胞懸液加入含6-8ml完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)過夜。第二天顯微鏡下觀察細胞生長情況和細胞密度。

RF6A猴脈絡(luò)膜-視網(wǎng)膜(內(nèi)皮)細胞系細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

對于貼壁RF6A猴脈絡(luò)膜-視網(wǎng)膜(內(nèi)皮)細胞系細胞傳代可以參考以下方法：

1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

2.加入0.25％（w/v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘（難消化的細胞可以適當延長消化時間），然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養(yǎng)基來終止消化。

3.輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。將細胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說明書要求配置的新的完全培養(yǎng)基以保持細胞的生長活力，后續(xù)傳代根據(jù)實際情況按1:2~1:5的比例進行。

RF6A猴脈絡(luò)膜-視網(wǎng)膜(內(nèi)皮)細胞系細胞凍存:收到細胞后建議在培養(yǎng)前3代時凍存一批細胞種子以備后續(xù)實驗使用。

運輸和保存

干冰運輸及復蘇好存活RF6A猴脈絡(luò)膜-視網(wǎng)膜(內(nèi)皮)細胞系細胞

（1）1mL凍存管包裝干冰運輸，收到后-80度冰箱保存過夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復蘇，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們聯(lián)系。

（2）T25瓶復蘇的存活細胞常溫發(fā)貨，收到后按照細胞接收后的處理方法操作。

應用^[4][5]

RF6A猴脈絡(luò)膜-視網(wǎng)膜(內(nèi)皮)細胞系可以用于茶葉中的脂肪酸及其對脈絡(luò)膜—視網(wǎng)膜RF/6A內(nèi)皮細胞生長的影響

探討茶葉中的脂肪酸,是否與視網(wǎng)膜健康相關(guān),正是論文研究的目的。

本文利用氣相色譜法對茶樹鮮葉不同葉位中脂肪酸的組成進行了測定和分析,結(jié)果表明茶葉的脂肪酸組成主要為長鏈脂肪酸,其中,以棕櫚酸(C16:0)和亞油酸(C16:2)、亞麻酸(C18:3)為主。櫧葉齊品種茶葉中亞油酸和亞麻酸的含量占脂肪酸總量的49.0～65.2%,含量最高的第二葉為3.16毫克/克鮮葉,其中亞油酸1.25毫克/克鮮葉,亞麻酸1.91毫克/克鮮葉;采用恒河猴脈絡(luò)膜視網(wǎng)膜內(nèi)皮細胞(Rhesur macaqud choroids-retinal endothelial cells,RF/6A)培養(yǎng)體系研究了棕櫚酸、亞油酸、亞麻酸三種長鏈脂肪酸對視網(wǎng)膜內(nèi)皮細胞生長的影響,通過研究亞油酸對自由基的清除作用及其對脂質(zhì)體中氧消耗的分析,探討了不飽和脂肪酸與視網(wǎng)膜脂質(zhì)過氧化之間的關(guān)系。

MTT(四甲基偶氮唑鹽)法檢測不同濃度脂肪酸單體作用不同時間對RF/6A細胞活力的影響,結(jié)果發(fā)現(xiàn),不同結(jié)構(gòu)的三種長鏈脂肪酸在低濃度時對細胞的影響有差異。小于400μM棕櫚酸對細胞存活率影響不大,ω-6系列亞油酸和ω-3系列亞麻酸對細胞生長有促進作用,其中,40-200μM亞麻酸處理細胞24小時使細胞增殖達到極顯著差異。

同時,三種脂肪酸在較高濃度下可抑制細胞活力。500μM棕櫚酸、400μM亞油酸、300μM亞麻酸分別處理細胞不同時間(12,24,36,46小時)后能顯著降低存活率。

參考文獻

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[4]Changes of Fatty Acid Contents,Lipoxygenase Activities,and Volatiles during Black Tea Mnaufacture.P.K.Mahanta,et al.J.Agric.Food Chem.1993

[5]陳萍.茶葉中的脂肪酸及其對脈絡(luò)膜—視網(wǎng)膜RF/6A內(nèi)皮細胞生長的影響[D].浙江大學,2006.