背景及概述^[1][2]

蟛蜞菊內(nèi)酯(wedelolactone)，化學(xué)名：7-甲氧基-5，11，12-三羥基苯駢呋喃香豆素，化學(xué)結(jié)構(gòu)式如下，蟛蜞菊內(nèi)酯為香豆素類化合物，具有保肝、抗炎、增強(qiáng)免疫等功效，1956年由Govindachari等人首次從蟛蜞菊(WedeliaCalendulacea)植物中分離得到，具有抗炎、止血、治療肺炎、肝硬化等功能，還可作為蛇毒的有效解毒劑，哈佛大學(xué)醫(yī)學(xué)院的袁鈞瑛教授發(fā)現(xiàn)蟛蜞菊內(nèi)酯能夠抑制脂多糖介入半胱天冬酶-11(Caspase-11)的誘導(dǎo)作用，可以用來治療腐敗性休克、中風(fēng)和其它炎癥方面的疾病。

制備^{[1] [3]}

一、目前，從墨旱蓮中制備蟛蜞菊內(nèi)酯的報(bào)道多為實(shí)驗(yàn)室規(guī)模，步驟較繁瑣，如張金生等（藥學(xué)學(xué)報(bào)，36(1):34-37，2011）報(bào)道采用石油醚-乙醚-甲醇或95%甲醇滲濾提取、甲醇溶解除雜或乙酸乙酯萃取除雜、硅膠柱分離獲取蟛蜞菊內(nèi)酯，其中分離洗脫劑采用甲苯-丙酮-醋酸（6:8:1）或二氯甲烷-甲醇-水（14:9:4下層）。

CN201310082363.X提供一種工藝簡單、易規(guī)?；闹苽湫路椒?，可以以墨旱蓮醇提物為原料，經(jīng)乙酸乙酯萃取、中壓或減壓硅膠柱色譜純化、重結(jié)晶 三個步驟，即可獲得純度大于98%的蟛蜞菊內(nèi)酯化學(xué)對照品，其規(guī)模可達(dá)十克級。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案：

1）乙酸乙酯萃取：

墨旱蓮醇提物，或墨旱蓮藥材經(jīng)體積分?jǐn)?shù)不小于70%的乙醇提取后減壓 干燥獲得醇提物，加入提取物重量3-5倍體積的水，加熱使其溶解，溫度控 制在30℃-40℃；加入提取物重量1-2倍體積的乙酸乙酯萃取，重復(fù)萃取2-4 次，合并萃取液，減壓濃縮至醇提物重量的1/3～1/6體積（ml/g），然后拌 入等比例重量（g/ml）的硅膠，干燥獲得乙酸乙酯萃取物干粉；

2）中壓或減壓硅膠柱色譜純化：

取徑高比為2～12.5的不銹鋼柱作為層析柱，裝入萃取物干粉1-2倍重量的硅膠作為層析分離硅膠，干法上樣；用石油醚：乙酸乙酯：醋酸（體積比8:2:1-6:4:1）混合溶劑洗脫，中壓柱壓力0.2-0.3MPa，減壓柱壓力在 -0.08-0.09MPa，薄層色譜檢測，以石油醚：乙酸乙酯：醋酸（體積比 3:7:0.5-5:5:0.5）為展開劑，收集Rf值在0.40-0.48的洗脫液，減壓濃縮，析出淺白色沉淀為蟛蜞菊內(nèi)酯粗品；

3）重結(jié)晶：

上述對照品粗品用乙酸乙酯或甲醇溶解，-4℃-10℃以下放置析晶，即可 獲得純度大于98%的蟛蜞菊內(nèi)酯對照品，其外觀為白色粉末。

二、全合成

蟛蜞菊內(nèi)酯在化學(xué)結(jié)構(gòu)上為一個多酚內(nèi)酯，在堿性條件下容易分解，所以從天然產(chǎn)物中提取純化比較困難，全合成制備方法已有報(bào)道。德國學(xué)者Wanzlick等1963年首次報(bào)道了由兒茶酚和4，5-二羥基-7-甲氧基香豆素為原料經(jīng)催化環(huán)合制備蟛蜞菊內(nèi)酯，但只提供了紅外數(shù)據(jù)。印度學(xué)者Pandey等1989年報(bào)道了相似的合成方法，他們以蘑菇中提取的酚氧化酶酪氨酸酶(EC1.14.18.1)為催化劑在pH＝6.8條件下兒茶酚和4，5-二羥基-7-甲氧基香豆素反應(yīng)環(huán)合得到蟛蜞菊內(nèi)酯，該合成方法收率較高，但酶催化劑成本高，難實(shí)現(xiàn)工業(yè)化生產(chǎn)。經(jīng)對現(xiàn)有技術(shù)的文獻(xiàn)檢索發(fā)現(xiàn)，中國發(fā)明專利(CN1566116)以3，4-二基苯甲醛和2，4，6-三羥基苯甲醛為起始原料，會聚式地合成兩個關(guān)鍵中間體取代苯乙炔和碘取代苯，通過Sonogashira偶聯(lián)反應(yīng)，再經(jīng)環(huán)合和脫保護(hù)等反應(yīng)步驟得蟛蜞菊內(nèi)酯，該合成方法中的關(guān)鍵中間體取代苯乙炔不易得，合成成本高，操作工藝繁瑣(均為柱層析)，不適合工業(yè)化生產(chǎn)。

CN200810033010.X提供一種蟛蜞菊內(nèi)酯的化學(xué)全合成方法，使其具有原料易得，工藝簡單，成本低，適合工業(yè)化生產(chǎn)的特點(diǎn)，克服了現(xiàn)有合成方法的缺點(diǎn)。

本發(fā)明是通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的，本發(fā)明采用合成方便且易得的2-溴-4，5-二芐氧基苯胺為原料與取代苯乙炔進(jìn)行Sonogashira偶聯(lián)反應(yīng)，經(jīng)重氮化水解得化合物2-[(4-甲氧基-2，6-二芐氧基苯基)乙炔基]-4，5-二芐氧基苯酚，再經(jīng)環(huán)合和脫保護(hù)等反應(yīng)步驟得蟛蜞菊內(nèi)酯。

本發(fā)明方法包括以下步驟：

步，2-乙炔-5-甲氧基-1，3-二芐氧基苯與2-溴-4，5-二芐氧基苯胺在鈀催化劑作用下進(jìn)行Sonogashira偶聯(lián)反應(yīng)得2-[(4-甲氧基-2，6-二芐氧基苯)乙炔基]-4，5-二芐氧基苯胺；

第二步，2-[(4-甲氧基-2，6-二芐氧基苯)乙炔基]-4，5-二芐氧基苯胺進(jìn)行重氧化水解得化合物2-[(4-甲氧基-2，6-二芐氧基苯基)乙炔基]-4，5-二芐氧基苯酚；

第三步，2-[(4-甲氧基-2，6-二芐氧基苯基)乙炔基]-4，5-二芐氧基苯酚在催化劑鈀作用下與一氧化碳進(jìn)行羰基環(huán)合反應(yīng)得化合物2-[(4-甲氧基-2，6-二芐氧基苯基)-5，6-二芐氧基]-3-苯并呋喃羧酸甲酯；

第四步，2-[(4-甲氧基-2，6-二芐氧基苯基)-5，6-二芐氧基]-3-苯并呋喃羧酸甲酯在Pd-C催化劑進(jìn)行加氫反應(yīng)得2-[(2，6-二羥基-4-甲氧基苯基)-5，6-二羥基]-3-苯并呋喃羧酸甲酯；

第五步，2-[(2，6-二羥基-4-甲氧基苯基)-5，6-二羥基]-3-苯并呋喃羧酸甲酯在酸催化下進(jìn)行內(nèi)酯化得蟛蜞菊內(nèi)酯。

本發(fā)明采用化學(xué)全合成方法制備成蟛蜞菊內(nèi)酯具有以下優(yōu)點(diǎn)：本發(fā)明使用2-溴-4，5-二芐氧基苯胺代替不易得的碘取代苯進(jìn)行Sonogashira偶聯(lián)反應(yīng)，經(jīng)重氮化水解得中間體，其合成成本降低。羰基成環(huán)反應(yīng)采用二氯化鈀代替昂貴的二碘化鈀，并且反應(yīng)中所用的鈀催化劑均進(jìn)行回收再利用，大大降低成本；每步合成操作均采用重結(jié)晶的方法代替文獻(xiàn)的柱層析，簡化操作過程，可以實(shí)現(xiàn)工業(yè)化生產(chǎn)。

藥理研究^[2]

自1956年首次從金盞蟛蜞菊中分離純化得到蟛蜞菊內(nèi)酯后，人們一直將其視為潛在藥物單體進(jìn)行研究，其抗癌功效也已漸漸被發(fā)現(xiàn)。研究表明，蟛蜞菊內(nèi)酯能有效抑制前列腺癌、乳腺癌、垂體腺瘤等多種癌細(xì)胞活性，殺傷腫瘤細(xì)胞并誘導(dǎo)其凋亡。此外，30μmol/L蟛蜞菊內(nèi)酯作用A549細(xì)胞36h后可顯著提升p-Caspase3、p53、p-STAT1基因的轉(zhuǎn)錄翻譯，而對STAT1的mRNA及蛋白表達(dá)無明顯影響，這表示經(jīng)蟛蜞菊內(nèi)酯處理可活化A549細(xì)胞中p-Caspase3、p53、p-STAT1等基因表達(dá)，促使細(xì)胞凋亡。蟛蜞菊內(nèi)酯呈一定劑量、時(shí)間依賴性降低A549細(xì)胞存活率，并阻滯細(xì)胞于G1期，增加細(xì)胞凋亡數(shù)量。蜞菊內(nèi)酯可上調(diào)A549細(xì)胞p-Caspase3、p53、p-STAT1等基因轉(zhuǎn)錄翻譯水平，而對STAT1基因表達(dá)無明顯影響，說明其對非小細(xì)胞肺癌有一定積極的作用，其作用機(jī)制與阻滯周期和促凋亡作用相關(guān)。

主要參考資料

[1] CN201310082363.X一種規(guī)?；苽潴豺嗑諆?nèi)酯化學(xué)對照品的方法

[2] CN201810746471.5 蟛蜞菊內(nèi)酯在制備治療肺癌產(chǎn)品中應(yīng)用的研究方法

[3] CN200810033010.X 蟛蜞菊內(nèi)酯的化學(xué)全合成方法