逆轉(zhuǎn)錄酶(全稱:依賴于RNA的DNA聚合酶)是一類存在于部分RNA病毒中具有逆轉(zhuǎn)錄活性、能以單鏈RNA為模板合成DNA的酶。由逆轉(zhuǎn)錄酶催化逆轉(zhuǎn)錄合成的DNA稱為互補DNA(cDNA)。
通常情況下,細胞內(nèi)的轉(zhuǎn)錄是以DNA為模板合成RNA的,所得RNA為信使RNA(mRNA)供蛋白質(zhì)合成作模板用。而在部分RNA病毒中,要實現(xiàn)自身的擴增,必須具有DNA,因此先由RNA逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA再由cDNA轉(zhuǎn)錄出RNA。
用途
逆轉(zhuǎn)錄酶可用于逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈式反應(yīng),將RNA轉(zhuǎn)變?yōu)镈NA后擴增,以獲得某生物體表現(xiàn)RNA的序列。
這些活化因子會將反轉(zhuǎn)錄病毒里的單股RNA轉(zhuǎn)化成雙股cDNA并且將之插入宿主細胞的基因里,在一段時間內(nèi)繁殖。相同的反應(yīng)被廣泛的應(yīng)用在實驗室中將RNA轉(zhuǎn)換成DNA如分子克隆,RNA測序,聚合酶鏈反應(yīng)(PCR),或是DNA微陣列。 良好的反轉(zhuǎn)錄酶研究物質(zhì)包含:
人類免疫缺陷病毒1型的反轉(zhuǎn)錄(PDB 1HMV)
莫洛尼鼠白血病病毒(英語:murine leukemia virus)的反轉(zhuǎn)錄酶
禽成髓細胞瘤病毒的反轉(zhuǎn)錄酶
維持真核細胞的染色體端粒存在的端粒酶反轉(zhuǎn)錄酶(英語:Telomerase reverse transcriptase)。
反轉(zhuǎn)錄的過程
反轉(zhuǎn)錄酶從RNA模板中制造出單股DNA。在缺乏DNA-dependent DNA聚合酶的病毒中,雙股DNA的制造可以經(jīng)由宿主編碼DNA聚合酶δ完成,過程中可能會將病毒的DNA-RNA引子誤認并且借由和引子去除類似的機制合成出雙股DNA,而在新的合成的DNA即取代了舊有的RNA模板。反轉(zhuǎn)錄的過程的錯誤率很高,因此在整個步驟中突變有很大的機會會發(fā)生。這種突變的現(xiàn)象可能會形成病毒的抗藥性。
DNA聚合酶活性
逆轉(zhuǎn)錄酶是由不同生化活性的不同結(jié)構(gòu)酶組成。盡管不同生物體來源的逆轉(zhuǎn)錄酶功能存在或多或少的差異,包括如DNA依賴性DNA聚合酶活性,但逆轉(zhuǎn)錄酶的主要功能仍取決于RNA依賴性DNA聚合酶和RNase H酶活性。逆轉(zhuǎn)錄過程通常涉及許多步驟:
在存在退火引物的條件下,逆轉(zhuǎn)錄酶結(jié)合到RNA模板并引發(fā)反應(yīng)。
RNA依賴性DNA聚合酶活性通過摻入dNTPs合成互補DNA鏈。
RNase H活性降解DNA:RNA復(fù)合物中的RNA模板。
DNA依賴性DNA聚合酶活性(如果存在)識別單鏈cDNA作為模板,使用RNA片段作為引物,合成第二鏈cDNA。形成雙鏈cDNA。