背景^[1]

SD208又稱2-[3-(6-甲基-2-吡啶基)-1H-吡唑-4-基]-1,5-萘啶，是一種有毒物質(zhì)。分子式:C17H10N6FCl分子量:352.7529。SD-208抑制TGF-β–敏感性CCL64細胞的生長抑制,EC50值為0.1μmol/L。細胞因子轉(zhuǎn)化生長因子(TGF)-β成為實驗治療人腦惡性膠質(zhì)瘤的的主要靶點。SD-208作為一種新型轉(zhuǎn)化生長因子β受體I激酶的抑制劑,抑制生長和侵襲,且增強體內(nèi)外小鼠和人腦膠質(zhì)瘤細胞的免疫原性。

體外實驗:SD-208抑制由重組TGF-β1或TGF-β2,或含TGF-β的膠質(zhì)瘤細胞上清液介導的TGF-β–敏感性CCL64細胞的生長抑制,EC50值為0.1μmol/L.SD-208也阻斷膠質(zhì)瘤細胞中的自分泌和旁分泌TGF-β信號,而其是通過Smad2或TGF-β的磷酸化報告實驗中檢測出來的,且SD-208強效抑制組成型和TGF-β誘發(fā)的遷移和侵襲,但是不抑制其活力或增殖。

另外,在重組TGF-β或含TGF-β的膠質(zhì)瘤細胞上清液存在時,SD-208可恢復多克隆自然殺傷細胞對膠質(zhì)瘤細胞的溶解活性.體內(nèi)實驗:在脾臟和大腦中,通過證明對TGF-β誘發(fā)的Smad磷酸化的抑制作用來驗證SD-208的口服生物利用度.在同系VM/Dk小鼠腦中植入SMA-560細胞后3天開始全身SD-208用藥,可將中位生存期從18.6延長至25.1天.組織學分析表明,血管形成\增殖或細胞凋亡方面沒有區(qū)別。

然而,動物SD-208用藥后可增加自然殺傷細胞\CD8 T細胞及巨噬細胞腫瘤浸潤.這些數(shù)據(jù)證實,TGF-β受體I激酶抑制劑(例如SD-208)是一種有前景的用于治療人腦惡性膠質(zhì)瘤和其他與病理TGF-β活性相關病癥的新藥劑。

應用^[2]

SD208 (TGF-βSmad抑制劑)可用于研究TGF-β信號通路負反饋調(diào)節(jié)對于機體的影響。SD208是TGF-β受體抑制劑,可以特異性抑制TGF-β信號通路。用TGF-β與SD208分別和共同處理人骨肉瘤細胞HOS、MG-63,采用劃痕實驗檢測TGF-β對細胞遷移的影響,侵襲實驗(Transwell)檢測TGF-β對細胞侵襲的影響,實時熒光定量聚合酶鏈鎖反應(qRT-PCR)檢測TGF-β與SD208處理細胞后PTHr P(甲狀旁腺激素相關蛋白)、解離素19(ADAM19)、白細胞介素-11(IL-11)、血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)和基質(zhì)金屬蛋白酶-2(MMP-2)基因的變化,蛋白免疫印跡檢測TGF-β與SD208對細胞PTHr P和MMP-2蛋白的作用。

TGF-β和SD208處理細胞后各基因、蛋白及侵襲和遷移能力的變化,通過Graphpad Prism 5統(tǒng)計學軟件進行統(tǒng)計分析,采用單因素方差分析經(jīng)行分析,兩兩比較采用Bonferroni法進行比較。

結(jié)果 TGF-β刺激骨肉瘤細胞后,細胞侵襲及遷移能力增強,HOS對照組、TGF-β組、SD208組和TGF-β+SD208組24 h侵襲細胞數(shù)分別為(73.4±5.2)個、(161.8±8.1)個、(55.3±4.5)個、(68.2±6.1)個,差異有統(tǒng)計學意(F=6.9,P<0.05);MG63細胞為(19.9±1.5)個、(32.3±2.2)個、(15.7±1.5)個、(17.6±2.5)個,差異有統(tǒng)計學意義(F=7.3,P<0.05)。TGF-β能夠明顯上調(diào)細胞PTHr P、ADAM19、IL-11、VEGF和MMP-2 mRNA的表達,同時PTHr P與MMP-2的蛋白表達明顯升高。

HOS對照組、TGF-β組、SD208組和TGF-β+SD208組PTHr P蛋白表達量分別為(0.2±0.02)、(0.5±0.07)、(0.2±0.02)、(0.2±0.14)差異有統(tǒng)計學意義(F=4.6,P<0.05)。MMP-2蛋白表達量分別為(0.4±0.03)、(0.8±0.02)、(0.2±0.02)、(0.3±0.02)差異有統(tǒng)計學意義(F=5.1,P<0.05)。結(jié)論外源性TGF-β能夠增強人骨肉瘤細胞HOS、MG-63細胞的侵襲和遷移能力,其機制可能與升高細胞內(nèi)PTHr P、ADAM19、IL-11、VEGF和MMP-2有關。SD208可以特異性抑制TGF-β信號通路。

參考文獻

1. Leung SY,Niimi A,Noble A,Oates T,Williams AS,Medicherla S,Protter AA,Chung KF.Effect of transforming growth factor-beta receptor I kinase inhibitor 2,4-disubstituted pteridine(SD-208) in chronic allergic airway inflammation and remodeling.J Pharmacol Exp Ther.2006;319(2):586-94.

2.  轉(zhuǎn)化生長因子對兩種人骨肉瘤細胞株侵襲和遷移的影響[J]. 樊攀,蘭海峰,陳藝,張姝江,白波.中華關節(jié)外科雜志(電子版) . 2017(02)