背景^[1-3]

SUPER TUBE狗腎細(xì)胞是從表觀正常的成年雌性可卡犬中建立了細(xì)胞株MDCK(ATCCCCL-34)，從中克隆建立了狗上皮樣細(xì)胞株SuperTube。當(dāng)維持高細(xì)胞濃度時(shí)，Supertube形成大量的小管(據(jù)報(bào)道，24孔板的每孔鋪7x105細(xì)胞，３天內(nèi)就能形成小管)。要形成小管，細(xì)胞需要每天兩次換液以提供足夠養(yǎng)分。與原始細(xì)胞株相比，SuperTube的c-AMP的檢測(cè)水平低得多，在forskolin刺激下讀出的腺苷環(huán)化酶水平也低；它的跨上皮抗性也比SuperDome(ATCCCRL-2286)和MDCK都低。

培養(yǎng)液成分：

體外細(xì)胞培養(yǎng)所需營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)與體內(nèi)基本相同，例如，需要糖、氨基酸、無(wú)機(jī)鹽、促生長(zhǎng)因子、微量元素等。將細(xì)胞所需的上述物質(zhì)按其種類(lèi)和所需數(shù)量嚴(yán)格配制而成的培養(yǎng)基，稱(chēng)為合成培養(yǎng)基。由于動(dòng)物細(xì)胞生活的內(nèi)環(huán)境還有一些成分尚未研究清楚，所以需要加入動(dòng)物血清以提供一個(gè)類(lèi)似生物體內(nèi)的環(huán)境，因此在使用合成培養(yǎng)基時(shí)，通常需加入血清、血漿等一些天然成分。

培養(yǎng)條件：

無(wú)菌、無(wú)毒的環(huán)境：對(duì)培養(yǎng)液和所有培養(yǎng)用具進(jìn)行無(wú)菌處理，通常還要在培養(yǎng)液中加入一定量的的抗生素，以防被污染。此外應(yīng)定期更換培養(yǎng)液，以便清除代謝產(chǎn)物防止細(xì)胞代謝產(chǎn)物累積對(duì)細(xì)胞自身產(chǎn)生危害。營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)：無(wú)機(jī)物（無(wú)機(jī)鹽、微量元素等），有機(jī)物（糖、氨基酸、促生長(zhǎng)因子等）；血清和血漿(提供細(xì)胞生長(zhǎng)必須的營(yíng)養(yǎng)成份)；溫度和pH（36.5±0.5℃，7.2～7.4）；氣體環(huán)境（95%的空氣+5%CO?的混合氣體）；其中5%CO?氣體是為保持培養(yǎng)液的pH穩(wěn)定。

應(yīng)用^[4][5]

用于狗腎細(xì)胞培養(yǎng)條件優(yōu)化研究

探討狗腎細(xì)胞培養(yǎng)影響因素,優(yōu)化狗腎細(xì)胞培養(yǎng)條件。

方法：將狗腎細(xì)胞以1×104的密度接種到96孔板上,改變狗腎細(xì)胞的培養(yǎng)條件:不同的溫度（35℃、36℃、37℃）、不同的培養(yǎng)基（MEM、DMEM、1640）、不同p H值（p H=6.4、6.7、7.0、7.2、7.5）、不同濃度的牛血清（0%、2.5%、5%、10%、15%）、不同濃度的L-谷氨酰胺（0、1、2、4 mmol/L）、不同濃度的4-羥乙基哌嗪乙磺酸（0、50、100、150 mmol/L）、不同濃度的CO2（0%、5%）,每日觀察細(xì)胞形態(tài)變化,并在24、48、72、96、120、144 h加入CCK-8測(cè)450 mm下的OD值,用OD值的倍數(shù)繪制MDCK細(xì)胞的增長(zhǎng)曲線(xiàn),比較不同生長(zhǎng)條件對(duì)MDCK細(xì)胞增殖的影響。

結(jié)果：狗腎細(xì)胞的培養(yǎng)條件為:37℃、5%濃度的CO2、DMEM培養(yǎng)基、p H值6.77.2、5%10%胎牛血清、4 mmol/L-谷氨酰胺、50100 mmol/L的4-羥乙基哌嗪乙磺酸。結(jié)論可以根據(jù)工作需要,調(diào)節(jié)牛血清濃度和溫度高低,來(lái)加速或減慢MDCK細(xì)胞的增殖速度。

參考文獻(xiàn)

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