背景[1-3]
Anti-ACTA2 Rabbit Monoclonal Antibody是一類可以特異性結合Anti-ACTA2的單克隆抗體，主要用于檢測Anti-ACTA2的Western Blot、IHC-P、IF、ELISA、Co-IP等多種免疫學實驗。
檢測原理：雙抗體夾心法測定標本中Anti-ACTA2水平。用純化的Anti-ACTA2抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入Anti-ACTA2，再與HRP標記的Anti-ACTA2抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的Anti-ACTA2呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標準曲線計算樣品中Anti-ACTA2濃度。
ACTA2（actin alpha 2）是一種肌動蛋白，有多個別名，包括α-肌動蛋白、α-肌動蛋白-2、主動脈平滑肌或α平滑肌肌動蛋白(α-SMA)。Actins是球狀多功能蛋白質的一個家族，形成微絲。ACTA2是6種不同肌動蛋白亞型之一，參與平滑肌的收縮。ACTA2（和所有actins一樣）極其保守，幾乎在所有哺乳動物中都有發(fā)現(xiàn)。在人類中，ACTA2由位于10q22-q24的ACTA2基因編碼。該基因突變導致多種血管疾病，如胸主動脈疾病、冠狀動脈疾病、中風、煙霧病和多系統(tǒng)平滑肌功能障礙綜合征。ACTA2（α-SMA）目前被認為是肌成纖維細胞的標志。
應用[4][5]
用于MMP1通路軸對乳腺癌轉移的研究
調控MMP1分泌的相關分子以及調控方式,為乳腺癌肺轉移的基礎和實驗研究提供靶點。
方法：(1)人乳腺癌細胞株MDA-MB-231與V2M4細胞總蛋白與MMP1特異性抗體做免疫共沉淀,尋找與MMP1直接作用的蛋白；質譜分析所有免疫共沉淀蛋白并行western驗證發(fā)現(xiàn)其中高低轉移株的差異蛋白(ACTA2);
(2)以實時定量PCR檢測相關蛋白mRNA水平變化；
(3) 以激光共聚焦證明細胞內MMP1與ACTA2蛋白確實存在結合；
(4) 以蛋白表達證明及Pull down實驗表明蛋白相互作用的直接性；
(5) 構建ACTA2基因沉默質粒并穩(wěn)定轉染V2M4,進一步做western及實時定量PCR檢測MMP1的表達；進行細胞侵襲實驗及增殖實驗,三維凝膠實驗；免疫缺陷鼠乳房墊注射后觀察體內成瘤及腫瘤肺轉移情況；
(6) ACTA2病毒過表達載體構建,MDA-MB-435及MDA-MB-231轉染,流式細胞儀篩選穩(wěn)定轉染細胞,并行ACTA2基因沉默質粒構建并穩(wěn)定轉染V2M4進一步做western及實時PCR檢測MMP1表達情況,行細胞侵襲實驗及增殖實驗,三維凝膠實驗；
(7) 利用含鈣及無鈣DMEM培養(yǎng)基檢測鈣對MMP1分泌的影響；
(8) 構建肌動蛋白特異性載體(pro-50)檢測ACTA2聚合與解聚對MMP1分泌的影響；篩選鈣特異性配體門控通道,得到TRPV6表達差異；
(9)構建TRPV6基因沉默載體并穩(wěn)定轉染Vb行體內體外實驗證明鈣通道對MMP1分泌的影響；以TRPV6的興奮劑與抑制劑進一步驗證實驗結果。
參考文獻
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[2]G-Protein–Coupled Receptors as Signaling Targets for Antiplatelet Therapy[J].Susan S.Smyth,Donna S.Woulfe,Jeffrey I.Weitz,Christian Gachet,Pamela B.Conley,Shaun G.Goodman,Matthew T.Roe,Athan Kuliopulos,David J.Moliterno,Patricia A.French,Steven R.Steinhubl,Richard C.Becker.Arteriosclerosis,Thrombosis,and Vascular Biology.2009(4)
[3]Increased expressions of cannabinoid receptor-1 and transient receptor potential vanilloid-1 in human prostate carcinoma[J].Gabriella Czifra,Attila Varga,Katalin Nyeste,Rita Marincsák,Balázs I.Tóth,Ilona Kovács,LászlóKovács,Tamás Bíró.Journal of Cancer Research and Clinical Oncology.2009(4)
[4]Functional genomics of cancer[J].Edison T Liu.Current Opinion in Genetics&Development.2008(3)
[5]石鵬程.MMP1通路軸對乳腺癌轉移的研究[D].復旦大學,2010.