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波形蛋白抗體的應(yīng)用

2020/8/24 10:41:01

背景[1-4]

波形蛋白抗體可以特異性結(jié)合波形蛋白主要用于Western blotting、Immunohistocry、ELISA、IF、IHC-P、IHC-F等生物實(shí)驗(yàn)。波形蛋白(Vimentin)是中間絲的其中一種蛋白質(zhì)。中間絲是真核生物細(xì)胞的重要結(jié)構(gòu)性特征。它們與微管及肌動(dòng)蛋白微細(xì)絲,組成細(xì)胞骨架。波形蛋白亦被發(fā)現(xiàn)是負(fù)責(zé)控制從溶酶體傳送由低密度脂蛋白(LDL)所衍生的膽固醇至酯化位點(diǎn)。

波形蛋白(Vimentin)是中間絲的其中一種蛋白質(zhì)。一個(gè)波形蛋白單體,與其他中間絲相似,有著一個(gè)中央α螺旋結(jié)構(gòu)域,在前端蓋著一個(gè)非螺旋的胺基,及于末端蓋著一個(gè)羧基。兩個(gè)單體會(huì)互相扭曲,形成一個(gè)卷曲螺管形狀的二聚物。波形蛋白的動(dòng)態(tài)性質(zhì)對(duì)細(xì)胞的靈活性非常重要。在試管的壓力測(cè)試中發(fā)現(xiàn),波形蛋白能提供微管及肌動(dòng)蛋白所沒(méi)有的彈性,因此波形蛋白是負(fù)責(zé)維持細(xì)胞骨架的完整性。一個(gè)波形蛋白單體,與其他中間絲相似,有著一個(gè)中央α螺旋結(jié)構(gòu)域,在前端蓋著一個(gè)非螺旋的胺基,及于末端蓋著一個(gè)羧基。兩個(gè)單體會(huì)互相扭曲,形成一個(gè)卷曲螺管形狀的二聚物。兩個(gè)二聚物會(huì)進(jìn)一步形成一個(gè)四聚物,再與其他四聚物相連成為一片。α螺旋序列包含一組疏水的氨基酸,這組氨基酸在螺旋表面形成一層“疏水性屏障”。這度屏障容許兩個(gè)螺旋互相卷曲。再者,當(dāng)中有著周期性分布的酸性及堿性氨基酸,能平衡卷曲螺旋二聚物。在帶電苛的剩余物之間距是建立離子鹽橋的地方,同樣能穩(wěn)定α螺旋結(jié)構(gòu)。有科學(xué)家認(rèn)為這道鹽橋不但可以提供內(nèi)鏈的相互作用,當(dāng)它由鹽橋轉(zhuǎn)為離子外鏈連結(jié)時(shí),可以造成中間絲。

波形蛋白的動(dòng)態(tài)性質(zhì)對(duì)細(xì)胞的靈活性非常重要。在試管的壓力測(cè)試中發(fā)現(xiàn),波形蛋白能提供微管及肌動(dòng)蛋白所沒(méi)有的彈性,因此波形蛋白是負(fù)責(zé)維持細(xì)胞骨架的完整性。另外,在沒(méi)有波形蛋白的細(xì)胞受到微少的針刺,會(huì)出現(xiàn)嚴(yán)重的傷害。在剔除波形蛋白基因的實(shí)驗(yàn)老鼠中,雖然它們有著正常的機(jī)能,但微管網(wǎng)卻因失去波形蛋白而受損。這加強(qiáng)了微管與波形蛋白之間親密的相互作用的說(shuō)法。再者,當(dāng)微管解聚物出現(xiàn)時(shí),波形蛋白會(huì)重組,重申了兩個(gè)系統(tǒng)的關(guān)系。

波形蛋白亦被發(fā)現(xiàn)是負(fù)責(zé)控制從溶酶體傳送由低密度脂蛋白(LDL)所衍生的膽固醇至酯化位點(diǎn)。當(dāng)這種運(yùn)送被阻礙時(shí),細(xì)胞內(nèi)會(huì)積存比平常較少的脂蛋白。這種關(guān)系是需要依賴中間絲網(wǎng)的細(xì)胞的個(gè)生物化學(xué)過(guò)程,且在腎上腺細(xì)胞亦有分枝,就是依賴從LDL生成膽固醇酯。

應(yīng)用[5][6]

波形蛋白抗體可用于抗突變型瓜氨酸波形蛋白抗體在類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎中的研究

采用酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法(ELISA)定量檢測(cè)75例RA患者及81例非RA患者血清的抗MCV抗體、抗環(huán)瓜氨酸肽(CCP)抗體、類(lèi)風(fēng)濕因子IgA型(RF-IgA)、類(lèi)風(fēng)濕因子IgG型(RF-IgG)和類(lèi)風(fēng)濕因子IgM型(RF-IgM),同步應(yīng)用間接免疫熒光法(IIF)測(cè)定抗角蛋白(AKA)抗體和抗核周因子(APF),檢測(cè)60例健康對(duì)照組的抗MCV抗體和抗CCP抗體,繪制受試者工作曲線(ROC曲線)評(píng)價(jià)抗MCV抗體和抗CCP抗體診斷RA的價(jià)值,并分析抗MCV抗體與抗CCP抗體、RF-IgA、RF-IgG、RF-IgM、AKA、APF的相關(guān)性。同期收集RA組患者的相關(guān)臨床數(shù)據(jù)(性別、年齡、病程、關(guān)節(jié)腫脹數(shù)、關(guān)節(jié)壓痛數(shù)、28個(gè)關(guān)節(jié)疾病活動(dòng)度評(píng)分)、實(shí)驗(yàn)室數(shù)據(jù)(血沉、C反應(yīng)蛋白)和超聲數(shù)據(jù)(灰階超聲半定量評(píng)分、能量多普勒半定量評(píng)分、滑膜炎超聲評(píng)價(jià)總分、骨侵蝕個(gè)數(shù)),分析抗MCV抗體與RA臨床及超聲病情評(píng)估的關(guān)系。最后,我們分析了抗MCV抗體與RA肺間質(zhì)病變的關(guān)系,建立了RA肺間質(zhì)病變的Logistic逐步回歸方程,初步篩選其相關(guān)危險(xiǎn)因素。

結(jié)果:

1、各個(gè)抗體陽(yáng)性率的比較:RA組抗MCV抗體、抗CCP抗體、RF-IgA、RF-IgG、RF-IgM、AKA、APF的陽(yáng)性率(85.33%、77.33%、74.67%、16.00%、88.00%、44.00%、68.00%)均顯著高于非RA組(12.35%、2.47%、16.05%、0.00%、25.00%、2.47%、2.47%,P均<0.05);RA組抗MCV抗體、抗CCP抗體的陽(yáng)性率(85.33%、77.33%)均顯著高于健康對(duì)照組(1.67%、0.00%,P均<0.05);非RA組抗MCV抗體的陽(yáng)性率高于健康對(duì)照組(12.35%VS1.67%,P<0.025),非RA組抗CCP抗體的陽(yáng)性率高于健康對(duì)照組(2.47%VS0.00%,P>0.025)。

2、抗MCV抗體與抗CCP抗體診斷價(jià)值的比較:抗MCV抗體的敏感性(85.33%)高于抗CCP抗體(77.33%),但差異沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);抗MCV抗體特異性(92.2%)低于抗CCP抗體(98.58%),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

參考文獻(xiàn)

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[6]庹航行.抗突變型瓜氨酸波形蛋白抗體在類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎中的研究[D].中南大學(xué),2014.

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