背景[1-3]
晚期糖基化終末產(chǎn)物特異性受體(抗體)是可以特異性結(jié)合晚期糖基化終末產(chǎn)物的一類多克隆抗體，主要用于檢測晚期糖基化終末產(chǎn)物的Western Blot、IHC-P、IF、ELISA、Co-IP等多種免疫學(xué)實驗。
AGEs是以蛋白質(zhì)、脂肪及核酸的氨基和還原糖（葡萄糖、果糖、戊糖等）為原料，發(fā)生非酶催化反應(yīng)，生成的穩(wěn)定的共價化合物。
晚期糖基化終末產(chǎn)物(advanced glycation end products，AGEs）晚期糖基化終產(chǎn)物是一組在蛋白質(zhì)、脂肪酸或核酸的氨基基團(tuán)與還原糖的醛基之間發(fā)生非酶性糖基化反應(yīng)(又稱Maillard反應(yīng)）所形成的一系列具有高度活性終產(chǎn)物的總稱，其結(jié)構(gòu)具有高度異質(zhì)性。
該反應(yīng)又稱為Maillard反應(yīng)。其具體形成過程如下：①大分子末端的還原性氨基與葡萄糖等還原糖分子中的醛基進(jìn)行加成形成可逆的Schiff bases，反應(yīng)迅速且高度可逆。形成的Schiff bases的數(shù)量主要取決于葡萄糖的濃度，當(dāng)葡萄糖被清除、濃度下降時，Schiff bases將在數(shù)分鐘內(nèi)發(fā)生逆轉(zhuǎn);②經(jīng)數(shù)天后，不穩(wěn)定的Schiff bases逐漸發(fā)生Amadori重排反應(yīng)并形成相對穩(wěn)定的醛胺類產(chǎn)物，此過程發(fā)生得較為緩慢，但快于其逆反應(yīng)，因此Amadori產(chǎn)物能在蛋白質(zhì)上積聚，并在數(shù)周內(nèi)達(dá)到平衡。Amadori產(chǎn)物的數(shù)量與葡萄糖的濃度相關(guān)。
AGEs在體內(nèi)的積聚引發(fā)糖尿病的各種并發(fā)癥。血管的基質(zhì)成分膠原蛋白糖基化并交聯(lián)；LDL與AGEs形成AGEs-LDL后，LDL的清除受障礙，體內(nèi)脂質(zhì)增加；內(nèi)皮下單核細(xì)胞受體與AGEs結(jié)合，單核細(xì)胞分泌細(xì)胞因子都會增加血管粥樣硬化發(fā)生的機會。
應(yīng)用[4][5]
探討了RAGE對于乳腺癌的生物學(xué)行為變化的影響。
方法：本研究分為體外和體內(nèi)研究兩個部分。體外研究中,選擇乳腺癌細(xì)胞系MDA-MB-231(三陰性)、SK-Br-3(HER2陽性)和MCF-7(ER陽性)作為研究對象,靶向RAGE的siRNA可降低這三種細(xì)胞系中RAGE基因的表達(dá)。
實時熒光定量PCR和Western blot檢測RAGE,NF-κB P65,Cyclin D1和PCNA的表達(dá)。MTT法和細(xì)胞周期分析法探討了RAGE敲低對乳腺癌細(xì)胞增殖和凋亡的影響。
另一方面,在體內(nèi)研究中,通過將21只裸鼠隨機分為六組：分別為RAGE-siRNA組、RAGE-siRNA+Doxorubicin組、Negative RNA+Doxorubicin組、Doxorubicin組、Negative siRNA組以及空白對照組,通過游標(biāo)卡尺測量、生物發(fā)光成像(BLI)和磁共振成像(MRI)監(jiān)測移植至裸鼠體內(nèi)的腫瘤生長情況。隨后通過免疫組化(IHC)分析腫瘤樣本中RAGE,PCNA,CyclinD1和NF-κB p65的表達(dá)水平。
結(jié)果：發(fā)現(xiàn)RAGE的表達(dá)水平與乳腺癌的嚴(yán)重程度相關(guān)。此外,下調(diào)RAGE表達(dá)可以使體外培養(yǎng)的三種乳腺癌細(xì)胞系(MDA-MB-231,SK-Br-3和MCF-7)的增殖水平下降并且可抑制移植到裸鼠體內(nèi)的腫瘤生長。
靶向RAGE的siRNA可將細(xì)胞阻滯在G1期并且抑制DNA的合成(P<0.05)。此外,實時熒光定量PCR,Western blot和免疫組化結(jié)果顯示,靶向RAGE的siRNA可降低核轉(zhuǎn)錄因子NF-κB p65、細(xì)胞增殖標(biāo)記PCNA和CyclinD1的表達(dá)。
參考文獻(xiàn)
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