概述[1]
本試劑盒使用獨(dú)特的裂解液迅速裂解細(xì)胞和滅活細(xì)胞RNA酶，植物RNA助提劑PLANTbalb幫助結(jié)合多糖多酚并通過離心去除,然后用乙醇調(diào)節(jié)結(jié)合條件后,RNA在高離序鹽狀態(tài)下選擇性吸附于離心柱內(nèi)硅基質(zhì)膜，再通過一系列快速的漂洗－離心的步驟, 去蛋白液和漂洗液將細(xì)胞代謝物，蛋白等雜質(zhì)去除， 最后低鹽的RNase free H20將純凈RNA從硅基質(zhì)膜上洗脫。
試劑盒特點(diǎn)
1.離心吸附柱內(nèi)硅基質(zhì)膜全部采用進(jìn)口世界著名公司特制吸附膜，柱與柱之間吸附量差異極小，可重復(fù)性好?？朔藝a(chǎn)試劑盒膜質(zhì)量不穩(wěn)定的弊端。
2.不需要使用有毒的苯酚，氯仿等試劑，也不需要乙醇沉淀等步驟。
3.快速，簡捷，單個(gè)樣品操作一般可在30分鐘內(nèi)完成。
4.獨(dú)特的植物RNA助提劑可以有效結(jié)合多糖多酚,提高清除效果。
5.多次柱漂洗確保高純度，OD260/OD280典型的比值達(dá)1.9～2.0，基本無DNA殘留,可用于RT-PCR，Northern-blot和各種實(shí)驗(yàn)。
試劑盒組份[1]
注意事項(xiàng)[1]
1. 所有的離心步驟均在室溫完成，使用轉(zhuǎn)速可以達(dá)到13000 rpm的傳統(tǒng)臺式離心機(jī)。
2. 需要自備乙醇，研缽(可選)。
3. 裂解液RLT和去蛋白液RW1中含有刺激性化合物，操作時(shí)戴乳膠手套，避免沾染皮膚，眼睛和衣服。若沾染皮膚、眼睛時(shí)，要用大量清水或者生理鹽水沖洗。
4. 關(guān)于DNA 的微量殘留：
一般說來任何總RNA 提取試劑在提取過程中無法完全避免DNA 的微量殘留，本試劑盒由于采取了本公司獨(dú)特的緩沖體系和選擇了特殊吸附能力的吸附膜已經(jīng)清除了絕大部分的DNA 殘留，在大多數(shù)RT-PCR 擴(kuò)增過程中極其微量的DNA 殘留影響不是很大，如果要進(jìn)行嚴(yán)格的mRNA 表達(dá)量分析如熒光定量PCR，我們建議在進(jìn)行模板和引物的選擇時(shí)：
1) 選用跨內(nèi)含子的引物，以穿過mRNA中的連接區(qū)，這樣DNA就不能作為模板參與擴(kuò)增反應(yīng)。
2) 選擇基因組DNA和cDNA上擴(kuò)增的產(chǎn)物大小不一樣的引物對。
3) 將RNA提取物用RNase-free的DNase I 處理。本試劑盒還可以用于DNase I處理后的RNA清潔(cleanup)，請聯(lián)系我們索取具體操作說明書。
4) 在步驟去蛋白液RW1漂洗前，直接在吸附柱上進(jìn)行DNase I柱上消化處理。購買DNA酶柱上消化試劑盒前可先索取具體操作說明書。
5. 關(guān)于復(fù)雜植物樣品提取殘留較多DNA的情況：
部分較復(fù)雜的植物樣品提取時(shí)，可能殘留較多DNA，可以嘗試本公司的ALH036植物RNA提取試劑盒。ALH036在ALH034植物RNA提取試劑盒基礎(chǔ)上，又獨(dú)特研發(fā)成功基因組DNA清除柱技術(shù)可以有效清除DNA殘留，在大多數(shù)情況下，可以將DNA殘留清除到紫外下觀測不可見。
6. 關(guān)于特別復(fù)雜難提取植物樣品提取失敗或者產(chǎn)量低的情況：
一些特別復(fù)雜的植物樣品提取，如葡萄果實(shí)，藍(lán)靛果果實(shí)等，ALH034裂解液RLT無法提取，需選擇ALH038多糖多酚/復(fù)雜植物RNA提取試劑盒。一些樣品產(chǎn)量較低，也可以嘗試ALH038多糖多酚/復(fù)雜植物RNA提取試劑盒。ALH038配有強(qiáng)力裂解液CLB選項(xiàng)，在很多情況下，可以提取復(fù)雜樣品或者明顯提高產(chǎn)量。
主要參考資料
[1] 植物RNA提取試劑盒產(chǎn)品說明書