背景^[1-3]

3-磷酸甘油醛脫氫酶單克隆抗體(內(nèi)參抗體)是可以特異性結(jié)合3-磷酸甘油醛脫氫酶的抗體蛋白。甘油醛-3-磷酸脫氫酶（Glyceraldehyde 3 phosphate dehydrogenase，GAPDH）是糖酵解（glycolysis）過(guò)程中的關(guān)鍵酶。除了在胞質(zhì)中作為糖酵解的酶以外，有證據(jù)表明哺乳動(dòng)物細(xì)胞中的GAPDH參與了多種胞內(nèi)生化過(guò)程，包括膜融合（membrane fusion）、微管成束（microtubule bundling）、磷酸轉(zhuǎn)移酶（phosphotransferase）激活、核內(nèi)RNA出核、DNA復(fù)制與DNA修復(fù)。一些生理因素，諸如低氧（hypoxia）和尿糖（diabetes），可以增加GAPDH在特定細(xì)胞中的表達(dá)。GAPDH存在于幾乎所有的組織中，以高水平持續(xù)表達(dá)。

GAPDH（甘油醛-3-磷酸脫氫酶）是參與糖酵解的一種關(guān)鍵酶，由4個(gè)30－40kDa的亞基組成。xy-13254R GAAα葡萄糖苷酶/溶酶體α-葡糖苷酶抗體GAPDH蛋白幾乎在所有組織中都高水平表達(dá)，廣泛用作Western blot蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)化的內(nèi)參,是很好的內(nèi)參抗體。GAPDH作為管家基因在同種細(xì)胞或者組織中的蛋白質(zhì)表達(dá)量一般是恒定的。在實(shí)驗(yàn)中，可能存在總蛋白濃度測(cè)定不準(zhǔn)確；或者蛋白質(zhì)樣品在電泳前上樣時(shí)產(chǎn)生的樣品間的操作誤差；這些誤差需要通過(guò)測(cè)定每個(gè)樣品中實(shí)際轉(zhuǎn)到膜上的GAPDH的含量來(lái)進(jìn)行校正，所以一般的western實(shí)驗(yàn)都需要進(jìn)行內(nèi)參設(shè)置。具體校正的方法就是將每個(gè)樣品測(cè)得的目的蛋白含量與本樣品的GAPDH含量相除，得到每個(gè)樣品目的蛋白的相對(duì)含量。然后才進(jìn)行樣品與樣品之間的比較。

應(yīng)用^[4][5]

用于GAPDH作為原核及真核生物通用型內(nèi)標(biāo)蛋白的研究及相關(guān)生物技術(shù)研發(fā)

甘油酸-3-磷酸脫氫酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPDH)是生物體內(nèi)一類(lèi)十分保守的重要多功能酶類(lèi)，廣泛存在于原核及真核生物體內(nèi)，如大腸桿菌、酵母、秀麗線蟲(chóng)、大鼠和小鼠等模式生物，主要參與生物體內(nèi)糖代謝中糖酵解的第六步反應(yīng)，即催化甘油醛-3-磷酸轉(zhuǎn)化為1,3-二磷酸甘油酸并釋放出能量(ATP)的過(guò)程。生物界中GAPDH單體分子量大小在30kD-40kD之間，天然狀態(tài)的GAPDH主要以四聚體形式存在，其氨基酸編碼序列在原核及真核生物體內(nèi)均高度保守，同源性高達(dá)76%。原核及真核生物體內(nèi)GAPDH蛋白是一類(lèi)功能上十分保守的重要蛋白酶超家族，在不同的物種中分別由不同的基因編碼，如微生物的gapA,gapB和gapC基因、酵母菌的TDH-1,TDH-2和TDH-3基因、秀麗線蟲(chóng)的gpd-1,gpd-2,gpd-3和gpd-4基因、大鼠的G3PDH基因等。不同物種中多種編碼基因的存在一方面提示了不同GAPDH變體之間的功能代償性，另一方面反映了個(gè)體應(yīng)對(duì)環(huán)境壓力的高度可調(diào)控性，為其作為管家蛋白的功能保守性提供了重要依據(jù)。

內(nèi)標(biāo)蛋白是生物體內(nèi)一類(lèi)重要的管家蛋白，具有序列保守性高、組織分布廣等特點(diǎn)。目如常見(jiàn)的內(nèi)標(biāo)蛋白主要包括：細(xì)胞骨架蛋白肌動(dòng)蛋白actin、微管蛋白Tubulin、細(xì)胞代謝相關(guān)蛋白GAPDH等。其中，GAPDH在同種細(xì)胞或組織中的蛋白表達(dá)量相對(duì)恒定，且很少受外部應(yīng)激因素的影響，已被廣泛用作RT-PCR和Western blot等分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)化的內(nèi)參分子，特別是其作為內(nèi)標(biāo)蛋白在組織或細(xì)胞內(nèi)蛋白相對(duì)表達(dá)定量中的應(yīng)用。雖然GAPDH作為內(nèi)標(biāo)蛋白的特性得到了廣泛應(yīng)用，但是以往僅集中于作為真核生物體內(nèi)蛋白表達(dá)相對(duì)定量的研究。

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[5]吳永紅.GAPDH作為原核及真核生物通用型內(nèi)標(biāo)蛋白的研究及相關(guān)生物技術(shù)研發(fā)[D].中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院,2013.