"KYSE-150 Cell:人食管鱗癌細(xì)胞系 細(xì)胞形態(tài):上皮細(xì)胞樣 細(xì)胞生長:貼壁 細(xì)胞背景資料:詳見相關(guān)文獻介紹 HeLa.S3細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:ND7/23細(xì)胞、Ocular Choroidal Melanoma-1細(xì)胞、BT474細(xì)胞 PC-9/S1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SU86-86細(xì)胞、H-498細(xì)胞、D407細(xì)胞 P30 OHK細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Ly1細(xì)胞、M-1細(xì)胞、SK-MEL-31細(xì)胞 U-373MG ATCC細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:IPLB-Sf21-AE細(xì)胞、A2780-CP細(xì)胞、HK-2 [Human kidney]細(xì)胞 細(xì)胞物種來源:人源或鼠源等其它物種來源 KYSE-150 Cell:人食管鱗癌細(xì)胞系 因為細(xì)胞生長的時候肯定是要相互聯(lián)系,大部分的細(xì)胞都是要成片生長的,尤其是對于貼壁細(xì)胞,單個細(xì)胞貼壁之后長著長著就長到一片去了。但是如果是成片的細(xì)胞抱團的話,傳代后細(xì)胞是不能貼壁的,這樣抱團的細(xì)胞就會死亡。所以,消化傳代的時候一定要將細(xì)胞消化成單個單個的獨立狀態(tài),這個啊是非??季磕愕墓Ψ虻?!細(xì)胞一旦脫落入懸液里你很難再將他吹打成單個,因為他沒有受力點了。很難找到受力點讓你對他吹打的力分散開細(xì)胞。所以必須要在細(xì)胞未脫落之前將其吹打開,受力點就是細(xì)胞貼壁的地方。這樣你就必須要嚴(yán)格控制好消化的程度啊,這和大師做飯掌握好火候是一樣的道理啊。既要消化到容易吹打下來,又不能太過,一吹就整片脫落,要單個單個地往下掉。所以我才要分批分次地加胰酶消化就是為了保證不同生長狀態(tài)貼壁程度的細(xì)胞能夠都維持在好的受力點分散開。這個是很重要的一點。尤其是對于某些細(xì)胞這一點就是他活去死的致命點。像Caco-2細(xì)胞就是如此。另外關(guān)于傳代很重要一點就是一定不能等到細(xì)胞長滿的時候才去消化傳代。要在細(xì)胞長到70%左右的時候就要傳代了,一旦發(fā)現(xiàn)細(xì)胞生長中已經(jīng)有疊層生長的時候就要立即進行消化傳代。不能再拖了。關(guān)于換液傳代時候洗瓶的問題。對于用DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng)的細(xì)胞,你在洗的時候如果是用無血清1640去洗細(xì)胞在隨即后的幾次中會比用DMEM洗的長的要好。同樣,用1640培養(yǎng)的也有這個現(xiàn)象。如果不嫌麻煩的話,可以用PBS來洗,洗的效果和用無血清培養(yǎng)基洗的效果基本上是一樣的,對于有些細(xì)胞會更勝一籌。洗的目的主要是洗去培養(yǎng)瓶里殘留的血清,防止它對胰酶的影響。這樣能夠保證胰酶的消化能力優(yōu)先,是很關(guān)鍵的一點。先補充這么多,還會后續(xù)更新。再補充一點:傳代時PBS洗是很重要的一步,最近發(fā)現(xiàn),用PBS就可以把細(xì)胞消化開來。加入PBS放置10-15分鐘,有些需要更長的時間,等到細(xì)胞一個個分離開來的時候,就可以直接吹打下來,但是和胰酶消化一樣,要控制好時間,不能時間太過了,要不然損傷細(xì)胞,細(xì)胞不容易成活,狀態(tài)容易不好。這個方法對于某些細(xì)胞是很管用的。有些細(xì)胞用胰酶消化不容易消化成單個的時候,或者臨時沒有胰酶了,可以選用此方法。不過一定要試試,看是否適合你的細(xì)胞。 細(xì)胞產(chǎn)品包裝:復(fù)蘇形式:T25培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存形式:1ml凍存管(兩支) 細(xì)胞傳代方法:1:2傳代 為什么培養(yǎng)的細(xì)胞要及時傳代?體外培養(yǎng)的細(xì)胞大多具有生長接觸抑制的特性,也就是說當(dāng)一個細(xì)胞被其他細(xì)胞包圍的時候,它就會停止生長,及時傳代后,細(xì)胞的生長得以繼續(xù)。培養(yǎng)細(xì)胞生長減慢的原因在哪些?其解決辦法有哪些?可能的原因有:更換了不同的培養(yǎng)液或血清;培養(yǎng)液中一些細(xì)胞生長必需成分如谷眈肢或生長因子等耗盡或缺乏或己被破壞;培養(yǎng)物中有少量細(xì)菌或真菌污染;試劑保存不當(dāng);比較新培養(yǎng)液與原培養(yǎng)液成分,比較新血清與舊血清等,找出其它可能的原因。解決辦法:增加起始培養(yǎng)細(xì)胞濃度;讓細(xì)胞逐漸適應(yīng)新培養(yǎng)液;換入新鮮配制培養(yǎng)液;補加谷酷肢或生長因子等;用無抗生素培養(yǎng)液培養(yǎng),如發(fā)現(xiàn)污染,去棄培養(yǎng)物,或用抗生素除菌;血清需保存在5℃到20℃; 培養(yǎng)液需在2-8℃避光保存;含血清完全培養(yǎng)液在2-8℃保存,并在2周內(nèi)用完;分離培養(yǎng)物,檢測支原體。冷凍管應(yīng)如何解凍?取出冷凍管后,須立即放入37℃水槽中快速解凍,輕搖冷凍管使其在1-2分鐘內(nèi)大部分融化,特別注意,需殘留一小塊冰塊,就可拿到超凈工作臺操作細(xì)胞,用75%酒精消毒凍存管,用新鮮培養(yǎng)基將細(xì)胞轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)瓶。另外冷凍管由液氮桶中取出解凍時,必須注意安全,預(yù)防冷凍管爆裂。 細(xì)胞來源說明:細(xì)胞主要來源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數(shù)國外著名大學(xué)建系 Gejiu Lung Carcinoma-82細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI-H1395細(xì)胞、87 MG細(xì)胞、OCILY-3細(xì)胞 NCI-H378細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:WRL-68細(xì)胞、RC-4B細(xì)胞、KHYG細(xì)胞 Panc 3.27細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:J774細(xì)胞、P3JHR-1細(xì)胞、HS852.T細(xì)胞 GalK 1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Homo sapiens No. 578, breast cells細(xì)胞、HEB細(xì)胞、WiDr細(xì)胞 CL34細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HuP-T4細(xì)胞、RCCJF細(xì)胞、OCI AML3細(xì)胞 細(xì)胞生長特性:貼壁生長 KYSE-150 Cell:人食管鱗癌細(xì)胞系 細(xì)胞凍存復(fù)蘇材料與方法步驟:常用的細(xì)胞冷凍貯存器為液氮貯存器,規(guī)格有35L和50L兩種。使用時要注意以下幾點:(1)一般兩周需充液氮一次,至少一個月充氮一次。液氮溫度達(dá)-196℃,使用時注意勿讓液氮濺到皮膚上,以免引起凍傷。(2)液氮容器為雙層結(jié)構(gòu),中間為真空層,瓶口有雙層焊接處,應(yīng)防止焊接部裂開。(3)在裝入液氮時,要注意緩慢小心,并用厚紙卷筒或特制漏斗作引導(dǎo),使液氮直達(dá)瓶底,如有專用液氮灌注裝置則更好。若為初次使用,加液氮時更要緩慢,以免溫度驟降而使容器損壞。細(xì)胞凍存時常備的材料有:0.25%胰蛋白酶,含10%~20%的血清培養(yǎng)液,DMSO(分析純)或無色新鮮甘油(121°C蒸氣高壓消毒),2mL安瓿(或?qū)S眉?xì)胞凍存管)、吸管、離心管、噴燈、紗布袋(或凍存管架)等。主要操作步驟為:(1)選擇處于對數(shù)生長期的細(xì)胞,在凍存前一天換液。將多個培養(yǎng)瓶中的細(xì)胞培養(yǎng) 液去掉,用0.25%胰蛋白酶消化。適時去掉胰蛋白酶,加入少量新培養(yǎng)液。用吸管吸取培養(yǎng)液反復(fù)吹打瓶壁上的細(xì)胞,使其成為均勻分散的細(xì)胞懸液。懸浮生產(chǎn)細(xì)胞則不要消化處理。然后將細(xì)胞收集于離心管中離心(1000r/min,10分鐘)。(2)去上清液,加入含20%小牛血清的完全培養(yǎng)基,于4℃預(yù)冷15分鐘后,逐滴加入已無菌的DMSO或甘油,用吸管輕輕吹打使細(xì)胞均勻,細(xì)胞濃度為3×106~1×107/mL之間。(3)將上述細(xì)胞分裝于安瓿或?qū)S美鋬鏊芰瞎苤?,安瓿裝1~1.5mL在火焰噴燈上封口,封口處要完全封閉,圓滑無勾。冷凍管要將蓋子蓋緊,并標(biāo)記好細(xì)胞名稱和凍存日期,同時作好登記(日期、細(xì)胞種類及代次、凍存支數(shù))。(4)將裝好細(xì)胞的安瓿或凍存管裝入沙布袋內(nèi);置于液氮容器頸口處存放過夜,次日轉(zhuǎn)入液氮中。采用控制降溫速度的方法也可采用下列步驟:先將安瓿置入4℃冰箱中2~3小時,再移至冰箱冷凍室內(nèi)3~4小時,再吊入液氮容器頸氣態(tài)部分存放2小時,最后沉入液氮中。細(xì)胞凍存在液氮中可以長期保存,但為妥善起見,凍存半年后,取出一只安瓿細(xì)胞復(fù)蘇培養(yǎng),觀察生長情況,然后再繼續(xù)凍存。 細(xì)胞形態(tài)特性:詳見細(xì)胞說明書 LUDLU1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:OCILY3細(xì)胞、CT-26 WT細(xì)胞、K562細(xì)胞 SK-N-MC細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Panc-02細(xì)胞、TE354T細(xì)胞、MDA-MB231細(xì)胞 IPI-2I細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:KP-N-RT-BM-1細(xì)胞、Hs870T細(xì)胞、TE-14細(xì)胞 COLO 320細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:THLE-2細(xì)胞、UM-UC-3細(xì)胞、NCI-H1876細(xì)胞 Hs675T細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:A2780/CP70細(xì)胞、Tu-177細(xì)胞、624 MEL細(xì)胞 H64細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:EC109細(xì)胞、NCI H82細(xì)胞、PLC PRF 5細(xì)胞 HCC4006細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:KAT-5細(xì)胞、HCC-94細(xì)胞、H-1184細(xì)胞 KYSE-150 Cell:人食管鱗癌細(xì)胞系 MZCRC1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:PNT-1A細(xì)胞、YD15細(xì)胞、HLF-a細(xì)胞 CCD1112Sk細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NB1RGB細(xì)胞、BL6細(xì)胞、MV-4:11細(xì)胞 MOLT 16細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:R.K.13細(xì)胞、HANK1細(xì)胞、NS20-Y細(xì)胞 SW954細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:KNS81細(xì)胞、MIA-Pa-Ca-2細(xì)胞、HCC15細(xì)胞 H295R細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Mia PACA 2細(xì)胞、MM134細(xì)胞、H660細(xì)胞 293-F細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:PC3M-IE8細(xì)胞、JIII細(xì)胞、C8161細(xì)胞 HGE細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Hs343T細(xì)胞、ECGI10細(xì)胞、A-2058細(xì)胞 UM-RC-2細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:PNEC30細(xì)胞、B95.8細(xì)胞、Hs832T細(xì)胞 UMR 106細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SW 1990細(xì)胞、BSC1細(xì)胞、PC-3M-IE8細(xì)胞 UMR 106細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SW 1990細(xì)胞、BSC1細(xì)胞、PC-3M-IE8細(xì)胞 VK-2/E6E7細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HS-445細(xì)胞、HT(H9)細(xì)胞、GLC82細(xì)胞 CRFK細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:TCC-PAN2細(xì)胞、JVM3細(xì)胞、NCI.H522細(xì)胞 Mv 1 Lu (NBL-7)細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:BCaP 37細(xì)胞、H-1944細(xì)胞、NCI-UMC-11細(xì)胞 CL 1-5細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:PANC-1細(xì)胞、H-1563細(xì)胞、IBMF-7細(xì)胞 DLD-1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HCC1419細(xì)胞、BGC-823細(xì)胞、LS1034細(xì)胞 SUM149PT細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HCC1954細(xì)胞、hTERT RPE1細(xì)胞、HEK293-F細(xì)胞 CHO K1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:CAL 78細(xì)胞、NCIH1623細(xì)胞、NCI-H82細(xì)胞 Swiss-3T3細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:H-1688細(xì)胞、Capan2細(xì)胞、HCC1395細(xì)胞 N1E115細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:ST-2細(xì)胞、Calu-6細(xì)胞、Kit225 K6細(xì)胞 H1581細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HSC-6細(xì)胞、L 132細(xì)胞、SPDC-CCL141細(xì)胞 MOVAS-1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Human Liver-7702細(xì)胞、NCI-H460細(xì)胞、WM266細(xì)胞 U266 Bl細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:H1651細(xì)胞、TM4細(xì)胞、SU.86.86細(xì)胞 G-292 clone A141B1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:EB2細(xì)胞、NCIH244細(xì)胞、LLC1細(xì)胞 SF295細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:H-2081細(xì)胞、Lu-165細(xì)胞、PK136細(xì)胞 EAhy926細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Hs.27細(xì)胞、C-33 A細(xì)胞、NCI-322細(xì)胞 MH7A細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HOK細(xì)胞、BHP-10細(xì)胞、H1793細(xì)胞 WM-239-A細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Daudi細(xì)胞、Jurkat (clone E6-1)細(xì)胞、MKN-28細(xì)胞 KMST-6細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:DF-1細(xì)胞、TK+/- (clone 3.7.2C)細(xì)胞、NCIH441細(xì)胞 GalK1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:CaEs17細(xì)胞、T/G HA VSMC細(xì)胞、MB-49細(xì)胞 BC-025細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Ramos G6.C10細(xì)胞、Human Microglia Clone 3細(xì)胞、NCI-H748細(xì)胞 ZYM-DIEC02細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HPaSteC(HPSC)細(xì)胞、RPPVEC細(xì)胞、NL20SV細(xì)胞 JeKo 1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HPAF-2細(xì)胞、TE-8細(xì)胞、hOMF細(xì)胞 Rat Basophilic Leukemia-1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Sp2/O-Ag14細(xì)胞、PG-LH7細(xì)胞、CAL-27細(xì)胞 CORL51細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:H1299細(xì)胞、CF Pac1細(xì)胞、Hs746-T細(xì)胞 NCIH2066細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:CAL-62細(xì)胞、hTERT-HME-1細(xì)胞、SUDHL10細(xì)胞 LCLC-103H細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Mouse Forestomach Carcinoma細(xì)胞、RPMI 7666細(xì)胞、PA-TU-8988S細(xì)胞 P388D1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:MCF7ADR細(xì)胞、LTEP-sm細(xì)胞、HCC-70細(xì)胞 Hs 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27細(xì)胞 P3-X63Ag8細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HCC 2185細(xì)胞、Reuber H35細(xì)胞、H460細(xì)胞 NCI-H2030細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:TK+/- (clone 3.7.2C)細(xì)胞、H-2591細(xì)胞、BIU-87/Adr細(xì)胞 H2291細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:RGC-6細(xì)胞、H841細(xì)胞、HCV-29細(xì)胞 GM-346細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:OVHM細(xì)胞、KM H-2細(xì)胞、NBLS細(xì)胞 SCC-4細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCIH1048細(xì)胞、A-10細(xì)胞、451-LU細(xì)胞 "
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