"KYSE-150 epithelioid cells人食管鱗癌細(xì)胞系 細(xì)胞背景資料:詳見相關(guān)文獻(xiàn)介紹 細(xì)胞形態(tài):上皮細(xì)胞樣 細(xì)胞凍存復(fù)蘇材料與方法步驟:常用的細(xì)胞冷凍貯存器為液氮貯存器,規(guī)格有35L和50L兩種。使用時(shí)要注意以下幾點(diǎn):(1)一般兩周需充液氮一次,至少一個(gè)月充氮一次。液氮溫度達(dá)-196℃,使用時(shí)注意勿讓液氮濺到皮膚上,以免引起凍傷。(2)液氮容器為雙層結(jié)構(gòu),中間為真空層,瓶口有雙層焊接處,應(yīng)防止焊接部裂開。(3)在裝入液氮時(shí),要注意緩慢小心,并用厚紙卷筒或特制漏斗作引導(dǎo),使液氮直達(dá)瓶底,如有專用液氮灌注裝置則更好。若為初次使用,加液氮時(shí)更要緩慢,以免溫度驟降而使容器損壞。細(xì)胞凍存時(shí)常備的材料有:0.25%胰蛋白酶,含10%~20%的血清培養(yǎng)液,DMSO(分析純)或無(wú)色新鮮甘油(121°C蒸氣高壓消毒),2mL安瓿(或?qū)S眉?xì)胞凍存管)、吸管、離心管、噴燈、紗布袋(或凍存管架)等。主要操作步驟為:(1)選擇處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞,在凍存前一天換液。將多個(gè)培養(yǎng)瓶中的細(xì)胞培養(yǎng) 液去掉,用0.25%胰蛋白酶消化。適時(shí)去掉胰蛋白酶,加入少量新培養(yǎng)液。用吸管吸取培養(yǎng)液反復(fù)吹打瓶壁上的細(xì)胞,使其成為均勻分散的細(xì)胞懸液。懸浮生產(chǎn)細(xì)胞則不要消化處理。然后將細(xì)胞收集于離心管中離心(1000r/min,10分鐘)。(2)去上清液,加入含20%小牛血清的完全培養(yǎng)基,于4℃預(yù)冷15分鐘后,逐滴加入已無(wú)菌的DMSO或甘油,用吸管輕輕吹打使細(xì)胞均勻,細(xì)胞濃度為3×106~1×107/mL之間。(3)將上述細(xì)胞分裝于安瓿或?qū)S美鋬鏊芰瞎苤校碴逞b1~1.5mL在火焰噴燈上封口,封口處要完全封閉,圓滑無(wú)勾。冷凍管要將蓋子蓋緊,并標(biāo)記好細(xì)胞名稱和凍存日期,同時(shí)作好登記(日期、細(xì)胞種類及代次、凍存支數(shù))。(4)將裝好細(xì)胞的安瓿或凍存管裝入沙布袋內(nèi);置于液氮容器頸口處存放過(guò)夜,次日轉(zhuǎn)入液氮中。采用控制降溫速度的方法也可采用下列步驟:先將安瓿置入4℃冰箱中2~3小時(shí),再移至冰箱冷凍室內(nèi)3~4小時(shí),再吊入液氮容器頸氣態(tài)部分存放2小時(shí),最后沉入液氮中。細(xì)胞凍存在液氮中可以長(zhǎng)期保存,但為妥善起見,凍存半年后,取出一只安瓿細(xì)胞復(fù)蘇培養(yǎng),觀察生長(zhǎng)情況,然后再繼續(xù)凍存。 SGC-7901/DDP細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:CCD-841CoTr細(xì)胞、DHL5細(xì)胞、LLCPK1細(xì)胞 SCC9細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI-H2135細(xì)胞、CCD-841-CoTr細(xì)胞、NIH:OVCAR-10細(xì)胞 JB 6細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:H1417細(xì)胞、16-HBE細(xì)胞、FC33細(xì)胞 細(xì)胞生長(zhǎng):貼壁 KYSE-150 epithelioid cells人食管鱗癌細(xì)胞系 細(xì)胞物種來(lái)源:人源或鼠源等其它物種來(lái)源 細(xì)胞產(chǎn)品包裝:復(fù)蘇形式:T25培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存形式:1ml凍存管(兩支) 為了防止因污染或技術(shù)原因使長(zhǎng)期培養(yǎng)功虧一簣,考慮到培養(yǎng)細(xì)胞因傳代而遲早會(huì)出現(xiàn)變異,有時(shí)因寄贈(zèng)、交換和購(gòu)買,培養(yǎng)細(xì)胞從一個(gè)實(shí)驗(yàn)室轉(zhuǎn)運(yùn)到另一個(gè)實(shí)驗(yàn)室,的策略是進(jìn)行低溫保存。這對(duì)于維持一些特殊細(xì)胞株的遺傳特性極為重要。現(xiàn)簡(jiǎn)要介紹深低溫保存法(-70℃~-196℃)的特點(diǎn)。細(xì)胞深低溫保存的基本原理是:在-70℃以下時(shí),細(xì)胞內(nèi)的酶活性均己停止,即代謝處于完全停止?fàn)顟B(tài),故可以長(zhǎng)期保存。細(xì)胞低溫保存的關(guān)鍵,在于通過(guò)0~20℃階段的處理過(guò)程。在此溫度范圍內(nèi),水晶呈針狀,極易招致細(xì)胞的嚴(yán)重?fù)p傷。凍存細(xì)胞的復(fù)蘇:凍存細(xì)胞較脆弱,要輕柔操作。凍存細(xì)胞要快速融化,并直接加入完全生長(zhǎng)培養(yǎng)基中。若細(xì)胞對(duì)凍存劑(DMSO或甘油)敏感,離心去除凍存培養(yǎng)基,然后加入完全生長(zhǎng)培養(yǎng)基中。直接鋪板方法:取出貯存細(xì)胞,37℃水浴中快速融化;直接用完全生長(zhǎng)培養(yǎng)基鋪板細(xì)胞。1ml凍存細(xì)胞使用10~20ml完全生長(zhǎng)培養(yǎng)基。進(jìn)行活細(xì)胞計(jì)數(shù),細(xì)胞接種應(yīng)該至少在3×10(5)活細(xì)胞/ml;培養(yǎng)細(xì)胞12到24小時(shí),更換新鮮的完全生長(zhǎng)培養(yǎng)基,去除凍存劑。離心方法:取出貯存細(xì)胞,37℃水浴中快速融化;把1到2ml凍存細(xì)胞加入到大約25ml完全生長(zhǎng)培養(yǎng)基,輕輕混勻;以大約80x離心2到3分鐘;棄去上清。在完全生長(zhǎng)培養(yǎng)基輕輕再次懸浮細(xì)胞,并且進(jìn)行活細(xì)胞計(jì)數(shù)。細(xì)胞鋪板,細(xì)胞接種應(yīng)該至少為3×10(5)活細(xì)胞/ml。細(xì)胞的分化:一個(gè)成年人全身細(xì)胞總數(shù)約1012個(gè),可以區(qū)分為200多種不同類型的細(xì)胞:形態(tài)結(jié)構(gòu),代謝,行為,功能等各不相同。追根溯源,這么多種細(xì)胞均來(lái)自一個(gè)受精卵細(xì)胞。所以,通常把發(fā)育過(guò)程中,細(xì)胞后代在形態(tài)、結(jié)構(gòu)和功能上發(fā)生差異的過(guò)程稱為細(xì)胞分化。細(xì)胞分化發(fā)生在胚胎階段,也發(fā)生在胎兒出生以后,乃至成人階段。例如,人體血細(xì)胞的產(chǎn)生和分化,這個(gè)過(guò)程在人的一生中一直持續(xù)著。由旺盛生長(zhǎng)不斷分裂的細(xì)胞,轉(zhuǎn)入分化,通常從細(xì)胞周期中G1期開始時(shí)一個(gè)確定的點(diǎn)G0點(diǎn)“逃逸”出細(xì)胞周期。旺盛生長(zhǎng)分裂的細(xì)胞和各種分化了的細(xì)胞,它們的基因表達(dá)和代謝活動(dòng)各不相同。 細(xì)胞傳代方法:1:2傳代 CA-46細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:B-95-8細(xì)胞、Daoy細(xì)胞、9L細(xì)胞 AAV-293細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:P19細(xì)胞、A1847細(xì)胞、HECV細(xì)胞 MLMEC細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:U-266細(xì)胞、GDM-1細(xì)胞、HuT-78細(xì)胞 U-138MG細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NS-20Y細(xì)胞、PC-9S1細(xì)胞、HFTF細(xì)胞 Calu-6細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:GTL-16細(xì)胞、SW-13細(xì)胞、GM06141細(xì)胞 細(xì)胞來(lái)源說(shuō)明:細(xì)胞主要來(lái)源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數(shù)國(guó)外著名大學(xué)建系 KYSE-150 epithelioid cells人食管鱗癌細(xì)胞系 細(xì)胞生長(zhǎng)特性:貼壁生長(zhǎng) 細(xì)胞形態(tài)特性:詳見細(xì)胞說(shuō)明書 為什么培養(yǎng)的細(xì)胞要及時(shí)傳代?體外培養(yǎng)的細(xì)胞大多具有生長(zhǎng)接觸抑制的特性,也就是說(shuō)當(dāng)一個(gè)細(xì)胞被其他細(xì)胞包圍的時(shí)候,它就會(huì)停止生長(zhǎng),及時(shí)傳代后,細(xì)胞的生長(zhǎng)得以繼續(xù)。培養(yǎng)細(xì)胞生長(zhǎng)減慢的原因在哪些?其解決辦法有哪些?可能的原因有:更換了不同的培養(yǎng)液或血清;培養(yǎng)液中一些細(xì)胞生長(zhǎng)必需成分如谷眈肢或生長(zhǎng)因子等耗盡或缺乏或己被破壞;培養(yǎng)物中有少量細(xì)菌或真菌污染;試劑保存不當(dāng);比較新培養(yǎng)液與原培養(yǎng)液成分,比較新血清與舊血清等,找出其它可能的原因。解決辦法:增加起始培養(yǎng)細(xì)胞濃度;讓細(xì)胞逐漸適應(yīng)新培養(yǎng)液;換入新鮮配制培養(yǎng)液;補(bǔ)加谷酷肢或生長(zhǎng)因子等;用無(wú)抗生素培養(yǎng)液培養(yǎng),如發(fā)現(xiàn)污染,去棄培養(yǎng)物,或用抗生素除菌;血清需保存在5℃到20℃; 培養(yǎng)液需在2-8℃避光保存;含血清完全培養(yǎng)液在2-8℃保存,并在2周內(nèi)用完;分離培養(yǎng)物,檢測(cè)支原體。冷凍管應(yīng)如何解凍?取出冷凍管后,須立即放入37℃水槽中快速解凍,輕搖冷凍管使其在1-2分鐘內(nèi)大部分融化,特別注意,需殘留一小塊冰塊,就可拿到超凈工作臺(tái)操作細(xì)胞,用75%酒精消毒凍存管,用新鮮培養(yǎng)基將細(xì)胞轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)瓶。另外冷凍管由液氮桶中取出解凍時(shí),必須注意安全,預(yù)防冷凍管爆裂。 L cells (TK-)細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Karpas 422細(xì)胞、H1882細(xì)胞、OV-CA 432細(xì)胞 Baby Hamster Kidney from litter No. 21細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:PCI-4B細(xì)胞、KATO III細(xì)胞、GFP-Olig2細(xì)胞 NALM6細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Ramos (RA)細(xì)胞、IPEC-J2細(xì)胞、CTV1細(xì)胞 H-660細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:P3X63細(xì)胞、WM266mel細(xì)胞、Y3-Ag123細(xì)胞 GM2219C細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:AK細(xì)胞、HEK 293-EBNA細(xì)胞、Loucy細(xì)胞 H2.35細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:LNT-229細(xì)胞、CCD1112Sk細(xì)胞、Karpas 299細(xì)胞 P31 FUJ細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:MDA-MB453細(xì)胞、PAMC82細(xì)胞、NT2/D1細(xì)胞 PE/CA-PJ-34細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SK-OV-433細(xì)胞、SUM52細(xì)胞、S-16細(xì)胞 H-2195細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:H-226細(xì)胞、Hs683細(xì)胞、D324 Med細(xì)胞 RPMI No. 1846細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI-H2081細(xì)胞、MDA-MB-231 #4175細(xì)胞、SK-OV-3細(xì)胞 KYSE-150 epithelioid cells人食管鱗癌細(xì)胞系 JB6Cl30細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:MLO-Y4細(xì)胞、H661細(xì)胞、DHL4細(xì)胞 A549/ATCC細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:DU-4475細(xì)胞、ReNcell CX細(xì)胞、CCD-841CoTr細(xì)胞 NCI-H1417細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:KTCTL-140細(xì)胞、SNU-620細(xì)胞、HuT78細(xì)胞 MDA-MB-134 VI細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:G292細(xì)胞、Centre Antoine Lacassagne-33細(xì)胞、Plaepi 34細(xì)胞 F36P細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:MiaPaCa-2細(xì)胞、WM-266-4細(xì)胞、373MG細(xì)胞 HCPEpiC細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:PT-67細(xì)胞、NCIH2172細(xì)胞、C2-C12細(xì)胞 HCPEpiC細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:PT-67細(xì)胞、NCIH2172細(xì)胞、C2-C12細(xì)胞 SW 579細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:ATN-1細(xì)胞、WM 115細(xì)胞、EPC細(xì)胞 PANC-10-05細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SNU-878細(xì)胞、TGBC11TKB細(xì)胞、B16 BL6細(xì)胞 BIU-87/Adr細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:OVCA 432細(xì)胞、PF-382細(xì)胞、KYSE50細(xì)胞 CHL-1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI-128細(xì)胞、HEK/EBNA細(xì)胞、MGH-U1細(xì)胞 Caki-1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NPA-87細(xì)胞、NCIH929細(xì)胞、GM-3573細(xì)胞 SW982細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:MD Anderson-Metastatic Breast-436細(xì)胞、HEI-193細(xì)胞、HS 1.Tes細(xì)胞 CHO cell clone K1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HCC-95細(xì)胞、SKNSH細(xì)胞、HCC9724細(xì)胞 KU-812-F細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SEM細(xì)胞、Mevo細(xì)胞、OCIAML2細(xì)胞 NCI-HUT-69細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SKUT1細(xì)胞、Karpas 299細(xì)胞、H596細(xì)胞 JIMT1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SKMel-28細(xì)胞、CL40細(xì)胞、Calu-6細(xì)胞 BIU87細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:H2591細(xì)胞、NCI-H358細(xì)胞、HSAEC1-KT細(xì)胞 MDCC MSB1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:MLA-144細(xì)胞、DoTc2-4510細(xì)胞、Porcine Kidney-13細(xì)胞 NCI-H719細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Ca 9-22細(xì)胞、HLEC細(xì)胞、JG細(xì)胞 L 929細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SUNE-1細(xì)胞、HPAF-II/CD18細(xì)胞、H711細(xì)胞 rRTEC細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:H596細(xì)胞、NCI-H1105細(xì)胞、MCF7ADR細(xì)胞 H1876細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:22Rv-1細(xì)胞、Mo7e細(xì)胞、GC9811-P細(xì)胞 Calu 6細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:LAN6細(xì)胞、H220細(xì)胞、K299細(xì)胞 HEK293A細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NK62a細(xì)胞、Panc 4.03細(xì)胞、L-540細(xì)胞 SW962細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:A375.S2細(xì)胞、HTR-8/SVneo細(xì)胞、3T6-Swiss albino細(xì)胞 SCC154細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Plaepi 34細(xì)胞、VM-CUB1細(xì)胞、BHT101細(xì)胞 Rabbit Kidney 13細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCIH1650細(xì)胞、A2780CP70細(xì)胞、SK-N-BE2C細(xì)胞 NCIH2347細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SW-48細(xì)胞、MFE296細(xì)胞、KOPN8細(xì)胞 RAMOS2G64C10細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:McCoy細(xì)胞、MADB106細(xì)胞、U-87MG細(xì)胞 D341 Med細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:A172細(xì)胞、ZR-75-30細(xì)胞、Doubling time: ~50 hours (ATCC).細(xì)胞 NCL-H548細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:MOLM13細(xì)胞、HH [Human lymphoma]細(xì)胞、BEAS 2B細(xì)胞 NCI-SNU-C2A細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SU 86.86細(xì)胞、TE4細(xì)胞、TE4細(xì)胞 MOLT-4細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HEL92.1.7細(xì)胞、RGC-5細(xì)胞、SNU668細(xì)胞 MB157細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SNU-1細(xì)胞、18G3.cl 1細(xì)胞、SK-ChA-1細(xì)胞 GM03320D細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:TK.10細(xì)胞、HLEB3細(xì)胞、RH35細(xì)胞 NCIH1755細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:FET細(xì)胞、RGM-1細(xì)胞、MILE SVEN1細(xì)胞 SNU-620細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:DoHH2細(xì)胞、NPC-TW01細(xì)胞、NCIH1435細(xì)胞 SNU-620細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:DoHH2細(xì)胞、NPC-TW01細(xì)胞、NCIH1435細(xì)胞 H-1650細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:IPLB-SF 21細(xì)胞、DAKIKI Clone 1細(xì)胞、U 266細(xì)胞 SNU-407細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HCC-44細(xì)胞、SK UT 1細(xì)胞、TE-1細(xì)胞 RBL 1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:DMS79細(xì)胞、NIH-OVCAR-3細(xì)胞、HeLa S-3細(xì)胞 D283 Med細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:253JB-V細(xì)胞、L 428細(xì)胞、BC3H1細(xì)胞 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