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酵母質粒小量抽提試劑盒
  • 酵母質粒小量抽提試劑盒

酵母質粒小量抽提試劑盒

價格 359
包裝 50次
最小起訂量 50次
發(fā)貨地 上海
更新日期 2024-12-25
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產品詳情

中文名稱:酵母質粒小量抽提試劑盒保存條件: 室溫保存,一年有效。
純度規(guī)格: 99.99%產品類別: 分子生物試劑 核酸相關
2024-12-25 酵母質粒小量抽提試劑盒 50次/359RMB 359 室溫保存,一年有效。 99.99% 分子生物試劑 核酸相關

酵母質粒小量抽提試劑盒

信裕生物生產的酵母質粒小量提取試劑盒(Yeast Plasmid Mini Preparation Kit)是一種使用破壁酶(Lyticase)消化去除酵母細胞壁,然后采用一種新型的酵母質粒純化柱實現從酵母細胞中進行小量質??焖俪樘岬脑噭┖?。
無需酚氯仿抽提,無需酒精沉淀,12個樣品只需約1-1.5小時即可完成。
試劑盒提供了破壁酶(Lyticase),酵母收集后,加入Lyticase消化去除細胞壁,接著采用傳統(tǒng)堿裂法裂解細胞,然后將獲得的上清液轉移至結合柱結合DNA,經過離心快速洗滌,最后用洗脫液洗脫出酵母質粒DNA。
由于采用了高濃度的破壁酶,無需再使用玻璃珠,可以避免因為玻璃珠的機械作用帶來的酵母基因組DNA污染。
每個質粒純化柱可以結合的質粒量的上限約為20微克。質粒DNA的產量依賴于酵母攜帶質粒的拷貝數,酵母菌株以及生長條件。通常酵母質粒的拷貝數較低,1.5-5ml培養(yǎng)過夜的酵母抽提獲得的質粒DNA量約為1-3微克左右。高拷貝酵母質粒抽提時的得率會大大提高。抽提所得質粒的量與酵母培養(yǎng)濃度、質??截悢?、酵母品系等因素有關。
使用本試劑盒抽提得到的酵母質粒DNA可用于各種常規(guī)分子生物學實驗,如轉化、PCR、基于PCR的突變、體外轉錄、酶切、測序、文庫篩選等。
包裝清單:

產品編號
產品名稱
包裝
KL-0029-1
酶解緩沖液
10ml
KL--0029-2
溶液Ⅰ(懸浮液)
15ml
KL-0029-3
溶液Ⅱ(裂解液)
15ml
KL--0029-4
溶液Ⅲ (結合液)
20ml
KL-0029-5
溶液Ⅳ (洗滌液)
18ml (次使用前每瓶加入27ml無水乙醇)
KL-0029-6
溶液Ⅴ (洗脫液)
3ml
KL--0029-7
RNase A (100mg/ml)
15μl
KL-0029-8
Lyticase
1管
KL-0029-9
Lyticase配制液
1.2ml
KL-0029-10
小抽質粒純化柱及廢液收集管
50套
說明書
1份

保存條件:
D0029-8需-20℃保存,其余室溫保存,一年有效。D0029-8為粉末,短時間4℃存放不影響其活性。D0029-8配制成Lyticase溶液后4℃可以保存1個月,-20℃可以保存6個月。
注意事項:
次使用前把試劑盒提供的RNase A全部加到溶液Ⅰ(懸浮液)中,混勻,并在瓶上做好標記。加入RNase A后4℃存放。
次使用前在每瓶溶液Ⅳ(洗滌液)中加入27ml無水乙醇,混勻,并在瓶上做好標記。
次使用前吸取1ml Lyticase配制液到Lyticase粉末中,完全溶解后即為Lyticase溶液。配制好的Lyticase溶液4℃可以保存1個月,-20℃可以保存6個月。如需-20℃保存,能適當分裝。Lyticase溶液配制后或凍存后再溶解可能會出現輕微混濁,屬正?,F象,請混勻后使用。

溫度較低時,溶液Ⅱ和溶液Ⅲ可能會有沉淀產生。使用前必須檢查一遍。如有沉淀,37℃水浴加熱溶解,混勻后使用。溶液Ⅱ請勿過分劇烈混勻,否則會產生大量氣泡。
溶液Ⅱ使用完后,一定要蓋緊瓶蓋,防止被空氣中二氧化碳酸化。
溶液II有強堿性,溶液Ⅱ、溶液Ⅲ和Lyticase對人體有刺激性,操作時請小心,并注意適當防護以避免直接接觸人體或吸入體內。
本試劑盒所有操作均在室溫進行,操作時無需冰浴。所有離心也均在室溫進行。
廢液收集管在一次抽提中需多次使用,切勿中途丟棄。
本產品僅限于專業(yè)人員的科學研究用,不得用于臨床診斷或治療,不得用于食品或藥品,不得存放于普通住宅內。
為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。

使用說明:
1. 取過夜菌至50毫升離心管內,5000g離心1分鐘收集細菌沉淀,棄上清。再重復一次,每管共收集100毫升過夜菌沉淀。
通常大腸桿菌宜用LB培養(yǎng)過夜(16小時左右)至OD值為2-4。建議5000g(通常為5000rpm左右)室溫離心1分鐘,如沉淀不充分則適當延長離心時間。時間過長或離心速度過快會使沉淀過于緊密,不利于加入溶液I后散開沉淀。直接倒掉上清,再倒入約50毫升菌液并重復上述操作,然后倒置于吸水紙上(可用普通草紙),使液體流盡。如果細菌密度明顯偏低,可考慮使用更多菌液,再重復上述操作1-2次。對于高拷貝質粒所用菌量每管一般不能超過150毫升,對于低拷貝質粒所用菌量每管一般不能超過200毫升。過量的細菌會導致后續(xù)的裂解不充分。
2. 每管加入5毫升溶液I,重懸細菌沉淀。確保沉淀完全散開,無可見細菌團塊。
確認溶液I中已添加了RNase A。最高速度vortex 10-20秒或更長時間,懸起沉淀。一定要充分混勻,對著光亮處觀察應呈均勻的懸濁液,無明顯細菌團塊或絮塊。如果沒有vortex,可以用槍吹打沉淀使沉淀逐漸散開,或手指把沉淀彈開。
3. 每管加入5毫升溶液II,輕輕顛倒離心管4-6次,室溫放置1-2分鐘,使細菌完全裂解,溶液透明。
切勿vortex!vortex或其它劇烈操作會導致基因組DNA斷裂,易導致最終所得質粒被基因組DNA污染。顛倒4-6次后,溶液應變得透明,無團塊或絮狀物。如果加入溶液I后細菌沒有完全散開,那么顛倒4-6次后,可能還會有團塊或絮狀物。遇到有少量團塊或絮狀物產生的情況,可以增加顛倒次數3-5次,再室溫放置2-3分鐘,但總裂解時間不可超過5分鐘。
4. 每管加入7毫升溶液III,隨即顛倒離心管4-6次混勻,可見白色絮狀物產生。
切勿vortex!顛倒次數也不宜過多,否則易導致最終所得質粒的質量下降。
5. 12,000-14,000rpm)室溫離心10分鐘。
如果離心機的最高速度較低,需要適當延長離心時間,例如約5000-6000rpm時需要離心20-30分鐘或更長時間,直至沉淀充分。離心時可以準備好質粒純化柱,自制漏斗等,并在純化柱上標上記號。
6. 將上一步驟離心后的上清倒入或吸入到質粒純化柱內。12,000-14,000rpm離心2分鐘,倒棄收集管內液體。
質粒倒入質粒純化柱后,可以不用等待,直接離心。倒棄收集管內的液體后,保留收集管繼續(xù)使用。本步驟及后續(xù)需要12,000-14,000rpm離心2分鐘的步驟,如果離心機的最高速度較低,需要適當延長離心時間,例如約5000-6000rpm時需要離心約5分鐘或更長時間,直至液體全部穿柱。如果離心后有少量漂浮物,可以考慮再次離心,或者使用擦鏡紙兩次對折后打開形成的自制漏斗,以過濾去除漂浮物。
7. 在質粒純化柱內加入12毫升溶液IV,12,000-14,000rpm離心2分鐘,洗去雜質,倒棄收集管內液體。
加入溶液IV后可以不用等待,直接離心。倒棄收集管內的液體后,保留收集管繼續(xù)使用。
8. 12,000-14,000rpm再次離心2分鐘,除去殘留液體并使痕量乙醇完全揮發(fā)。
注意:倒棄收集管內液體后再離心,才能徹底去除微量的溶液IV。微量的溶液IV會影響質粒的質量。
9. 將質粒純化柱置于50毫升離心管上,加入2毫升溶液V至管內柱面上,放置2分鐘。
也可以用重蒸水或MilliQ級純水替代溶液V,但是水的pH應不小于6.5。溶液V加入后放置時間稍長,對于增加質粒產量會略有幫助。如想得到較高濃度的質粒,可以加入1毫升溶液V洗脫,質粒得率實測減少約5-10%,具體減少量與特定樣品有關。
10. 12,000-14,000rpm離心2分鐘,所得液體即為轉細胞級超純質粒。
通常所得質粒濃度為0.1-0.3mg/ml左右,可以用于細胞轉染。如果想得到高濃度的質粒,可以采用如下的異丙醇沉淀方法濃縮質?;虺R?guī)的乙醇沉淀方法。
a. 加入0.7倍體積的常溫異丙醇(例如1毫升待濃縮質粒中加入0.7毫升異丙醇),混勻后1,2000-14,000rpm 4℃離心10分鐘,小心吸去上清液,避免觸及沉淀。
如果希望獲得較高濃度的質粒,在洗脫時推薦采用1毫升洗脫液進行洗脫,后續(xù)可以轉移到2毫升離心管內進行異丙醇沉淀,這樣操作起來相對比較方便。異丙醇沉淀的DNA為玻璃狀近透明的顆粒狀沉淀,和乙醇沉淀產生的含鹽沉淀物相比較難觀察清楚。離心后取放離心管要盡量輕柔,避免沉淀松動或部分顆粒狀懸浮至溶液中。不推薦直接倒棄上清,直接倒棄上清時經常出現直接把質粒沉淀倒掉的情況;如果偏好直接倒棄上清,建議把上清倒棄至一潔凈離心管內,這樣萬一沉淀被倒出,仍然可以從潔凈離心管中回收。推薦用移液槍吸去上清,并注意盡量避免吸走沉淀。
b. 加入1毫升常溫70%乙醇溶液,輕輕懸起質粒沉淀以充分洗滌,12,000-14,000rpm 4℃離心5-10分鐘,小心吸去上清液,避免觸及沉淀。
c. 5,000-10,000rpm 4℃離心5-10秒,用20微升或200微升移液器小心吸凈殘留液體,避免觸及沉淀。
d. 肉眼觀察無明顯液體后(吸凈液體后通常在1分鐘內即可完成干燥),加入適當體積的溶液(如溶液V、10mM Tris-Cl pH8.5或Milli-Q級純水)溶解DNA。
DNA樣品不能過于干燥,否則很難溶解。在弱堿性條件下溶解DNA,溶解時可用緩沖液反復沖洗管壁,使管壁上的DNA充分溶解。

附表1. EndA- and EndA+ strains of E. coli.

EndA-
EndA+
BJ5183
BL21(DE3)
DH1
CJ236
DH20
HB101
DH21
JM83
DH5α
JM101
JM103
JM110
JM105
LE392
JM106
MC1061
JM107
NM522 (all NM series are EndA+)
JM108
NM554
JM109
P2392
MM294
PR700 (all PR series are EndA+)
SK1590
Q358
SK1592
RR1
SK2267
TB1
SRB
TG1
TOP10
Y1088 (all Y10 series are EndA+)
XL1-Blue
BMH 71-18
XLO
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關鍵字: 酵母質粒小量抽提試劑盒說明書;酵母質粒小量抽提試劑盒廠家

公司簡介

上海康朗生物科技有限公司是一家集研發(fā)、生產、銷售、服務于一體的一家生物科技企業(yè),專營生化試劑、標準品、基因、蛋白、抗體、Elisa試劑盒、細胞生物學,分子生物學等高生物產品。總部位于上海,并在北京、廣東,江西,吉林等全國30多個省市設有分公司和代理機構。涉及的產品被中國科學院、清華、北大、復旦,上海交大,復旦醫(yī)學院,上海中醫(yī)藥大學,華東師范大學,第二軍醫(yī)大學,曙光醫(yī)院,浦東新區(qū)人民醫(yī)院等知名科研院所廣泛使用,可靠而穩(wěn)定的質量和完善的售后服務確。
成立日期 2015-05-29 (10年) 注冊資本 100萬元整
員工人數 50-100人 年營業(yè)額 ¥ 100萬以內
主營行業(yè) 中間體,化學試劑,醫(yī)藥原料 經營模式 工廠
  • 上??道噬锟萍加邢薰?/span>
VIP 6年
  • 公司成立:10年
  • 注冊資本:100萬元整
  • 企業(yè)類型:廠家
  • 主營產品:主營產品:ELISA試劑盒、重組蛋白、抗體、生化試劑、標準品、分子生物學試劑、細胞生物學等科研用品
  • 公司地址:松江區(qū)新橋鎮(zhèn)賣新公路2077號3089室
詢盤

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