Terminal Deoxynucleotidyl Transferase (5U/μl)
Terminal Deoxynucleotidyl Transferase，簡稱TdT，中文名稱為末端脫氧核糖核酸轉(zhuǎn)移酶，是一種非模板依賴的DNA聚合酶，可以催化在寡核苷酸、單鏈或雙鏈DNA的3'羥基端加上dNTP。可以催化的寡核苷酸的最短長度為3個核苷酸。有報道TdT也可以在RNA的3'羥基端加上NTP，但對于RNA的催化活性要弱于DNA。
用途：寡核苷酸或DNA 3'羥基末端標記；DNA末端加尾(DNA tailing)；5'-RACE；合成同一種脫氧核苷酸的寡聚鏈等。
來源：由大腸桿菌表達，表達基因的來源為小牛胸腺。
活性定義：37℃ 60分鐘內(nèi)，催化1nmol dNTP加入到多聚核苷酸3'羥基末端中所需的酶量定義為1個活性單位。
酶活性檢測條件：200mM potassium cacodylate (pH7.2), 1mM CoCl2,0.1mM DTT, 0.01% (v/v) Triton X-100, 10μM
oligo(dT)10,1mM dTTP and 0.4MBq/ml[3H]-dTTP。
純度：不含DNA內(nèi)切酶和外切酶，不含RNase。
酶儲存溶液：100mM KAc (pH6.8), 2mM 2-mercaptoethanol, 0.01% (v/v) Triton X-100 and 50% (v/v) glycerol。
Reaction Buffer (5X)：0.125M Tris (pH7.2 at 25℃), 1M potassium cacodylate, 0.05% (v/v) Triton X-100, 5mM
CoCl2。
失活或抑制：70℃加熱10分鐘或加入適量EDTA均可導(dǎo)致Terminal Deoxynucleotidyl Transferase失活。金屬離子螯合劑，較高濃度的銨根離子、氯離子、碘離子和磷酸根均對Terminal Deoxynucleotidyl Transferase有抑制作用。
包裝清單：
XY-7092M-1
TdT (5U/μl)
500μl
XY-7092M-2
Reaction Buffer (5X)
1.5ml
保存條件：
-20℃保存。
注意事項：
酶使用時宜放在冰盒內(nèi)或冰浴上，使用完畢后宜立即放置于-20℃保存。
本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
使用說明：
1. DNA 3'末端標記：
a. 參考如下表格設(shè)置反應(yīng)體系：
待標記DNA
10 pmol of 3'-termini
[α-32P]-ddATP, ～10TBq/mmol(3000Ci/mmol)
1.85 MBq(50μCi)
b. 按上表設(shè)置好反應(yīng)體系后，輕輕混勻(可以用移液器吹打混勻或用Vortex在最低速度輕輕混勻)，隨后離心沉淀液體。
c. 37℃孵育20分鐘。
d. 70℃孵育20分鐘或加入5μl 0.5M EDTA終止反應(yīng)。
說明：標記的效率和3'羥基末端的類型有關(guān)，3'突出末端的標記效率要顯著高于3'縮進末端或平末端的標記效率。
2. DNA末端加尾(DNA Tailing)：
a. 參考如下表格設(shè)置反應(yīng)體系：
DNA片斷
1 pmol of 3'-termini
dATP or dTTP
130pmol(20 μCi)
或 dGTP or dCTP(四種中通常只需加入一種)
(3000 Ci/mmol)
60pmol
b. 按上表設(shè)置好反應(yīng)體系后，輕輕混勻(可以用移液器吹打混勻或用Vortex在最低速度輕輕混勻)，隨后離心沉淀液體。
c. 37℃孵育15分鐘。
d. 70℃孵育15分鐘或加入5μl 0.5M EDTA終止反應(yīng)。
說明：在上述反應(yīng)條件下，每個3'羥基末端可以加上100-130個dA或dT，或20-30個dC或dG。
3. 其他用途可以參考上述用途或適當?shù)奈墨I資料進行。
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