胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶（glutathione S-transferase，GST）試劑盒說明書
分光光度法 50管/48樣
注 意：正式測定之前選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定。
測定意義：
GST是一種具有多種生理功能的蛋白質(zhì)家族，主要存在于細胞質(zhì)內(nèi)。GST是體內(nèi)解毒酶系統(tǒng)的重要組成部分，主要催化各種化學物質(zhì)及其代謝產(chǎn)物與GSH的巰基共價結(jié)合，使親電化合物變?yōu)橛H水物質(zhì)，易于從膽汁或尿液中排泄，達到將體內(nèi)各種潛在或具備毒性的物質(zhì)降解并排出體外的目的。因此，GST在保護細胞免受親電子化合物的損傷中發(fā)揮著重要的生物學功能。此外，因為GST具有GSH-Px活性，亦稱為non-Se GSH-Px，具有修復(fù)氧化破壞的大分子如DNA、蛋白質(zhì)等的功能。注意，GST催化的反應(yīng)減少GSH含量，但是不增加GSSG含量。
測定原理：
GST催化GSH與CDNB結(jié)合，其結(jié)合產(chǎn)物的光吸收峰波長為340nm；通過測定340nm波長處吸光度上升速率，即可計算出GST活性。
自備儀器和用品：
紫外分光光度計、低溫離心機、水浴鍋、可調(diào)節(jié)移液器、1mL石英比色皿和蒸餾水。
試劑組成和配置：
試劑一：液體50mL×1瓶，4℃保存。
試劑二：液體45mL×1瓶，4℃保存。
試劑三：粉劑×1瓶，4℃保存。臨用前加5 mL蒸餾水溶解。
粗酶液提取：
1. 組織：按照組織質(zhì)量（g）：試劑一體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL試劑一）進行冰浴勻漿。8000g，4℃離心10min，取上清置冰上待測。
2. 細菌、真菌：按照細胞數(shù)量（104個）：試劑一體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細胞加入1mL試劑一），冰浴超聲波破碎細胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時間3min）；然后8000g，4℃，離心10min，取上清置于冰上待測。
3. 血清等液體：直接測定。
測定操作：
1. 分光光度計預(yù)熱30 min，調(diào)節(jié)波長到340 nm，用蒸餾水調(diào)零。
2. 試劑三放在25℃（一般物種）或者37℃（哺乳動物）保溫。
3. 測定管：取1mL石英比色皿，加入100μL上清液，900μL試劑二和100μL試劑三，迅速混勻后于340nm測定吸光度變化，記錄10 s和310 s吸光度為A1和A2。
GST活性計算公式：
(1). 按蛋白濃度計算
活性單位定義：在25℃或者37℃中，每毫克蛋白每分鐘催化1nmol/L CDNB與GSH結(jié)合為1個酶活單位。
GST（nmol/min/mg prot）=(A2－A1))÷ε÷d×109×V反總÷(Cpr×V樣)÷T
=230×((A2-A1) ÷Cpr
(2). 按樣本質(zhì)量計算
活性單位定義：在25℃或者37℃中，每克樣品每分鐘催化1nmol/L CDNB與GSH結(jié)合為1個酶活單位。
GST（nmol/min/g鮮重）=(A2-A1)÷ε÷d×109×V反總÷(W×V樣÷V樣總)÷T
=230×(A2-A1) ÷W
（3）按細胞數(shù)量計算
活性單位定義：在25℃或者37℃中，每104個細胞每分鐘催化1nmol/L CDNB與GSH結(jié)合為1個酶活單位。
GST（nmol/min/104 cell）=(A2-A1)÷ε÷d×109×V反總÷(細胞數(shù)量×V樣÷V樣總)÷T
=230×(A2-A1) ÷細胞數(shù)量
（4）按液體體積計算
活性單位定義：在25℃或者37℃中，每毫升液體每分鐘催化1nmol/L CDNB與GSH結(jié)合為1個酶活單位。
GST（nmol/min/mL）=(A2-A1)÷ε÷d×109×V反總÷V樣÷T
= 230×(A2-A1)
ε：產(chǎn)物摩爾消光系數(shù)，9.6×103 L/mol /cm；d：比色皿光徑，1cm；106：1mol=1×106μmol；V反總：反應(yīng)體系總體積，1100μL=0.0011 L；Cpr：上清液蛋白質(zhì)濃度（mg/mL），需要另外測定，建議選用本公司生產(chǎn)的BCA蛋白質(zhì)濃度測定試劑盒；V樣：加入反應(yīng)體系中上清液體積，100μL=0.1 mL；V樣總：加入提取液體積，1mL；W，樣本質(zhì)量，g；T：反應(yīng)時間（min），5min。
注意事項：
1. 樣品處理等過程均需要在冰上進行，且須在當日測定酶活力；
2. 細胞中GST活性測定時，細胞數(shù)目須在300萬-500萬之間，細胞中GST的提取時可加試劑一后研磨或超聲波處理，不能用細胞裂解液處理細胞；
3. 本法測定GST活性的線性范圍可達76 μmol/min /L，測定前先用1～2個樣做預(yù)實驗，如5min內(nèi)反應(yīng)不成線性，須對樣品用蒸餾水稀釋，計算結(jié)果乘以稀釋倍數(shù)；
4. 測定反映的溫度對測定結(jié)果有影響，請控制在25℃或者37℃（哺乳動物）。
關(guān)鍵字： 谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶（glutathion;谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶（glutathion;
上海雅吉生物科技有限公司成立于2011年3月，是一家面向生命科學領(lǐng)域，提供科研類試劑、耗材、儀器、技術(shù)服務(wù)的生物企業(yè)。包括分子生物學、免疫學、微生物學、細胞學等 。旗下?lián)碛?“雅吉生物”、“晶風生物”、“彩佑實業(yè)”、“GTX” 品牌。通過公司各部門員工的共同努力在行業(yè)內(nèi)擁有較高知名度，深得新老客戶厚愛，本著“優(yōu)質(zhì)、服務(wù)、信譽”的精神，堅持以優(yōu)良的技術(shù)、優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品、良好的信譽為國內(nèi)外廣大用戶提供優(yōu)質(zhì)生物產(chǎn)品和服務(wù)。
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