RNase H

RNase H，即Ribonuclease H，中文名為核糖核酸酶H，是一種核糖核酸內切酶，可以特異性地水解DNA-RNA雜合鏈中的RNA。RNase H不能水解單鏈或雙鏈DNA或RNA中的磷酸二酯鍵，即不能消化單鏈或雙鏈DNA或RNA。
      特點：特異性消化DNA-RNA雜合鏈中的RNA，常用于cDNA第二鏈的合成。
      用途：DNA-RNA雜合鏈中去除RNA，例如cDNA第二條鏈合成前去除mRNA；通過互補的DNA序列實現對RNA的定點剪切；除去雜交到poly(dT)上的mRNA中的poly(A)；體外多腺苷酸化反應(polyadenylation reaction)產物研究。
      來源：E.coli MRE-600細胞。
      分子量：約18.4kDa(單體)。
      活性定義：37℃20分鐘內，能夠催化1nmol雜合雙鏈中的RNA形成酸可溶性核糖核苷酸形式所需的酶量定義為1個活性單位。
      活性檢測條件：20mM Tris-HCl(pH7.8)，40mM KCl，8mM MgCl₂，1mM DTT，24μM[³H]-poly(A).poly(dT)，
0.03mg/ml BSA ，4%(v/v)glycerol。
      純度：不含DNA內切酶和外切酶，不含其它核糖核酸酶。
      酶儲存溶液：25mM HEPES-KOH(pH8.0)，50mM KCl，1mM DTT，1mM EDTA，0.1mg/ml BSA，50%(v/v)glycerol。
      Reaction Buffer(10X)：200mM Tris-HCl(pH7.8)，400mM KCl，80mM MgCl₂，10mM DTT。
      失活或抑制：65℃加熱10分鐘可使RNase H失活。金屬離子螯合劑和巰基封閉劑均能抑制RNase H活性。
包裝清單：

保存條件：
      -20℃保存。
注意事項： 
      酶使用時宜存放在冰盒內或冰浴上，使用完畢后宜立即放置于-20℃保存。
      本產品僅限于專業(yè)人員的科學研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內。
      為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。 

使用說明：
1. DNA-RNA雜合鏈中去除RNA：
a. 用反轉錄酶，例如BeyoRT M-MuLV反轉錄酶或BeyoRT M-MuLV反轉錄酶(RNase H-)合成cDNA條鏈，70℃孵育10分鐘終止反應。
b. 在冰浴上向已經合成條鏈的20μl反應體系中依次加入如下試劑：

c. 按上述體系配好之后，輕輕混勻(可以用移液器吹打混勻或用Vortex在最低速度輕輕混勻)，隨后離心沉淀液體。
d. 37℃孵育1小時。
e. 加入2.5μl 0.5M EDTA(pH8.0)混勻，以終止反應。
f. 后續(xù)可以使用酚氯仿抽提、乙醇沉淀等方法純化合成的雙鏈cDNA，也可以使用適當的DNA純化試劑盒進行純化。DNA純化試劑盒(D0033)可以向碧云天訂購。
說明：其他情況DNA-RNA雜合鏈中去除RNA的條件可以參考上述條件進行。RNase H反應的pH范圍約在7.5-8.3均可。
2. 雜合鏈中RNA的去除和cDNA第二鏈的合成：
a. 用反轉錄酶，例如BeyoRT M-MuLV反轉錄酶(D7153)、BeyoRT M-MuLV反轉錄酶(RNase H-)(D7159)或BeyoRT cDNA鏈合成試劑盒(RNase H-)(D7166)合成cDNA條鏈，70℃孵育10分鐘終止反應。
b. 在冰浴上向已經合成條鏈的20μl反應體系中依次加入如下試劑：

c. 按上述體系配好之后，輕輕混勻(可以用移液器吹打混勻或用Vortex在最低速度輕輕混勻)，隨后離心沉淀液體。
d. 15℃孵育2小時。(注意：反應溫度不能超過15℃)
e. 加入5μl 0.5M EDTA(pH 8.0)混勻，以終止反應。
f. 后續(xù)可以使用酚氯仿抽提、乙醇沉淀等方法純化合成的雙鏈cDNA，也可以使用適當的DNA純化試劑盒進行純化。DNA純化試劑盒(D0033)可以向碧云天訂購。
注：Reaction Buffer(10X)for DNA Polymerase I：500mM Tris-HCl(pH 7.5 at 25℃)，100mM MgCl₂，10mM DTT。
3. 其他用途請參考上述用途或相關文獻資料進行。