動物胞漿蛋白微量制備試劑盒
產(chǎn)品及特點 DNA 只存在于細胞核內(nèi),因此參與轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)和 DNA 復(fù)制的蛋白質(zhì)主要存在于細胞核中,要研究蛋白質(zhì)與 DNA 的相互作用,首先需要制備能夠與 DNA 作用的天然細胞核蛋白質(zhì)。目前、細胞核蛋白質(zhì)制備方法一般都比較繁瑣,一次處理大量樣品時尤其不便,為此本公司開發(fā)了本產(chǎn)品,用于從哺乳動物組織和培養(yǎng)細胞核蛋白的微量提取,它具有下列特點: 1. 提取制備過程簡便,只需要一小時。 2. 實驗重復(fù)性好,尤其適合同時處理多個樣品。 3. 可用于培養(yǎng)的動物細胞,也可以用于組織細胞。 4. 制備的核蛋白能保持天然活性,可以直接用于轉(zhuǎn)錄因子活性分析、凝膠阻滯實驗(gel shift assay)、免疫共沉淀、Western Blotting、DNA 足跡圖實驗和甲基化干擾實驗酶活性測定等研究。 運輸及保存 低溫運輸,4℃保存,有效期一年。 自備試劑 PBS 緩沖液,PMSF 溶液,DTT 溶液
使用方法 1、 對貼壁細胞:將 5×105-7 個細胞培養(yǎng)到覆蓋率為 55-65%,吸棄培養(yǎng)基,用自備的預(yù)冷 PBS 緩沖液洗滌細胞一次,將細胞從壁上小心刮下,轉(zhuǎn)移到預(yù)冷的塑料離心管中,4℃ 3000 rpm 離心 5 分鐘,小心棄上清。直接進入第三步進行后續(xù)處理。 2、 對懸浮細胞:直接將 5×105-7 個的懸浮細胞轉(zhuǎn)移到 1.5 mL 預(yù)冷的塑料離心管中,4℃ 3000 rpm 離心 5 分鐘,用自備的預(yù)冷的 PBS 洗滌細胞沉淀一次,3000 rpm 離心 5 分鐘,小心棄上清。直接進入第三步處理細胞沉淀。說明:懸浮細胞制備胞漿的效果一般好于貼壁細胞。 3、 在細胞沉淀中加入相當(dāng)于沉淀細胞體積 5 倍或更多的預(yù)冷的溶液 A 重懸細胞,一般不超過 300 uL-500 uL 溶液 A。溶液 A 在臨用前好加入終濃度為 0.2mM 的 PMSF 和 1mM 的 DTT。PMSF 和 DTT 在水溶液中都不穩(wěn)定,只能臨用提加入。 4、 冰浴靜置 10 分鐘。 5、 將細胞轉(zhuǎn)移到預(yù)冷的 15 mL 的 Dounce 或 Potter 玻璃勻漿器中(溫和破裂細胞用),上下勻漿 10-15 次(為檢查效果,可取少量裂解物與自備的 0.01%Trypan Blue 溶液混合,在顯微鏡下觀察,只有破裂細胞的細胞核才能染色,完整細胞無色。如果需要,可增加勻漿次數(shù)直到 80-90%以上的細胞裂解為止 )。 6、 小心轉(zhuǎn)移到預(yù)冷的離心管中,4℃ 17000g 離心 15 分鐘,線粒體,細胞核等細胞器將沉淀到管底。保留上清(胞漿部分)待用。
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